基因工程 教学课件 作者 袁婺洲 主编 第三章 第一部分.pdfVIP

基因工程 第三章 目的基因的制备与鉴定 湖南师范大学生命科学学院 袁婺洲 2 0 1 0 湖南师范大学生命科学学院 基因工程 本章目录 • 3.1 从基因文库获取目的基因 • 3.2 从GENEBANK基因组数据库获取目的基因 • 3.3 PCR技术获取与扩增目的基因 • 3.4 通过蛋白质工程改建目的基因 • 3.5 目的基因的鉴定 2 0 1 0 湖南师范大学生命科学学院 基因工程 第一节 从基因文库获取目的基因 基因文库 (gene library)或DNA文库（ (DNA library)） 是指在细菌中增殖来自某一生物的染色体DNA 或cDNA 所形成的全部 DNA片段克隆的集合体。 • 基因组文库 • cDNA文库 2 0 1 0 湖南师范大学生命科学学院 基因工程 一、 基因组文库genome library 把某种生物的基因组DNA切成适当大小， 分别与载体结合，导入宿主细胞，形成克隆。 这样的克隆片段的总汇，叫基因组文库. 基因组文库应包含基因组中的各种DNA顺 序，每种顺序至少有一份代表。 2 0 1 0 湖南师范大学生命科学学院 基因工程 基 因 组 文 库 的 构 建 过 程 2 0 1 0 湖南师范大学生命科学学院 基因工程 1. 基因组DNA的制备 • 为了最大限度地保证基因在克隆过程中的完整性， 基因组文库构建的DNA在分离纯化操作中应尽量 避免过度的断裂。 • 用常规方法制备的染色体DNA的长度一般在100 kb左右 • 低熔点琼脂糖包埋固定法制备的染色体DNA为大 分子量DNA(HMW),长度可达500 kb 2 0 1 0 湖南师范大学生命科学学院 基因工程 2. 基因组DNA的切割 • 超声波处理后的DNA片段呈平头末端，需加装人 工接头。 • 部分酶切法一般