鸡传染性贫血对DF细胞适应性的初探.pdfVIP

中国畜牧兽医学会禽病学分会第十五次学术研讨会论文集 鸡传染性贫血对DF细胞适应性的初探 孙丹丹，杨兵’，苏霞，陈小玲 (北京市海淀区曙光花园中路9号北京市农林科学院畜牧兽医研究所100097) Byanglll@yahoo．㈣．cn 前言 时即可接种病毒。弃去细胞培养生长液，用预热至 鸡传染性贫血病毒(CAV)于1979年由日本学37℃的无血清细胞培养液轻洗一次。向24孔板中 者Yuasa等首次报道，此后相继在西德、瑞典等国陆接种病料上清液200}d，在37℃放置1．5h，使病毒吸 续证实了本病毒的存在。我国于1992年首次分离附在细胞膜上。在此期间，将细胞培养板轻轻摇动 到CAV，并在其他多个省份用血清学方法检测到该 几次，以防止细胞未接触接种物。吸附完毕后吸弃 病毒的存在。CAV主要侵害骨髓造血组织和中枢 病毒上清液，按生长液量换加维持液，在37℃，5％ 免疫器官胸腺，导致骨髓黄化和胸腺萎缩，引起再生 c02培养箱内进行培养，每隔两小时在低倍显微镜 障碍性贫血和免疫抑制及继发感染。国外对CAV 下观察细胞直至18h，后每六小时观察一次，当大部 的研究比较深入，已有CIA灭活苗研究的报道。A分细胞病变后，收毒。否则，连续观察5日，如无细 Pa96s—mant6等(1997)报道研制出CAV细胞毒油佐 胞病变则采用如下方法继续盲传。 剂灭活苗，具有良好的免疫效力。现有鸡传染性贫 反复冻融后再次传代：细胞接毒5天后，将细胞 血活疫苗Cux—l株活疫苗免疫种鸡保护子代，可以培养板冻存于一70℃冰箱，反复冻融3次，将接毒细 很好地控制CIA，但由于其存在毒力返强的危险至 今仍未能在世界大部分地区批准使用。 5min，吸取200pL上清液，同上述方法进行接种及观 在Yuasa等(1983)发现一些T淋巴细胞系(MD— 察细胞生长情况。 CC—MSBl和MDCC—JP2)和B淋巴细胞系LSCC— 直接刮取再次传代：细胞接毒5天后，用枪头刮 110481适用于CAV的增殖和检测以后，利用细胞培 取200pL细胞及培养液，同上述方法进行接种及观 养分离和增殖病毒成为首选方法。Todd等发现鸡察细胞生长情况。 贫血病毒在细胞上多次传代后，CAV致病力有所降 如此反复15代，每次收毒后进行PCR检测。 低，但不稳定，回归鸡上10代后，又会重新返强。研 结果与讨论 究证明，许多其它T细胞和B细胞成淋巴样细胞 显微镜观察细胞变化：接毒的DF在第一代时 系，不管是各自病毒的产毒者或非产毒者，对CAV 24小时出现了大部分网状结构消失，细胞呈圆形等 都有抵抗力。DF细胞系是经过改造的可连续传代 细胞病变；第二代和第三代时48小时出现细胞病 的鸡胚成纤维细胞，本试验通过同步接毒法对CAV 变；第四代以后没有观察到细胞病变。PCR检测结 在DF细胞上生长情况进行了初步探究，为以后 果：CAV能在接毒的DF中前三代，偶尔在第五代及 CAV的分离培养及疫苗的研究提供依据。 第八代检测到，其余代次不能检测到。反复冻融细 材料与方法 胞毒和直接刮取细胞毒再次传代并无显著差异，同 病料准备：称取检测感染CAV的肝脏病料lg，时也说明CAV对于DF宿主无依赖性。本研究表 加入5ml PBS，50m双抗进行研磨，反复冻融多次明，CAV可以在DF上生长，但在多次传代中生长状 4000f／rain，离心10分钟，取上清液0．22pm滤膜过滤 况并不稳定。试验过程中我们观察到DF的铺板起 备用。