基于不同力学微环境大鼠骨折愈合模型的建立及对局部CGRP受体表达影响的实验研究.pdfVIP

第六届《中华骨科杂志》论坛·基础与骨病 基于不同力学微环境大鼠骨折愈合模型的建立 及对局部cG】[冲受体表达影响的实验研究 邢丹 马信龙 马剑雄 徐卫国 陈阳 王杰 杨阳 朱少文 马宝意 冯睿 天津市天津医院骨研所生物力学室 前言 骨折愈合是一个复杂的生物学修复过程，受多方面因素的影响。经典的woIff定律详细阐述了 力学刺激与骨重塑过程的关系。人体正常骨骼不停地进行着骨的重建和修复过程，这与骨愈合的力 学机制一致。因此，只有充分了解骨折愈合的力学环境，尤其是力学环境调控骨折愈合的具体机制， 才能够指导临床正确治疗骨折，才能有助于对骨材料工程以及骨代谢的科学研究。与骨折愈合力学 环境相关的因素较多，包括固定的稳定性、骨折类型、骨折断端的应力类型等。多数情况下，骨折 端骨痂的应力来源于身体的负重。目前已有较多的研究围绕骨折断端应力的频掣1，21、应力的大小‘3， 4|、应力的形式(5垲J以及断端间隙的大小【3】与骨折愈合的关系展开。 目前，大鼠骨折模型的建立为骨折愈合的研究提供了良好的平台，人们基于此开展了生物力学、 组织学、生物化学以及分子生物学方面的研究。之所以较多的研究选择大鼠作为骨折愈合的研究对 象，是基于以下4点原因：(1)价格低廉以及饲养成本低，适宜开展大样本的研究；(2)利用某些抗 体，开展分子机制和信号通路的研究；(3)生长快速，使观察周期缩短；(4)方便用于骨愈合相关影 响因素的研究。这些优点是其他动物模型无法比拟的。因此，多数学者推荐使用大鼠进行骨折愈合 的研究。但是需要根据不同的研究目的，选择不同的内固定模型。 多肽。CGRP由降钙素基因编码而成，降钙素基因由2800个碱基对组成，其中内含5个内含子和6 个外显子。它在不同组织中进行记忆重组，并表达不同产物，如在神经组织则表达为cGRP，在甲 状腺表达为降钙素。CGI冲主要来源于感觉神经末梢，由脊髓后根神经节神经元细胞产生，通过轴 浆运输到达神经末梢，以分泌颗粒的形式存储在胞浆中，随神经末梢广泛分布于周围器官。cGRP 是目前已知的最强的微血管扩张物质，随着研究的深入，CGPR对骨代谢的调节作用也已经明确【lo】。 CGRP通过与受体结合调节成骨细胞和破骨细胞功能，从而参与调节骨的生长、修复以及改建过程。 目前国内外的研究较多集中在建立神经损伤或脑损伤动物模型，研究神经末梢分泌cGRP与骨折愈 合的关系【ll’12J。例如，观察脊髓损伤、坐骨神经损伤或中枢神经损伤对骨折愈合的影响。虽然目前 的研究证实cGRP具有促进骨折愈合的作用，但cGRP促进骨折愈合的信号传导机制以及cGRP的 具体作用部位还有待于进一步研究证实。更重要的是，目前对骨折所处的生物力学环境与CGRP受 体表达水平的关系尚不清楚。改变骨折部位的力学环境是否会促进骨折愈合尚无人研究。因此，我 们提出如下设想：既然不同的力学环境对骨折愈合产生不同的影响，那么在骨折愈合过程中cGRP 受体的表达对不同力学环境的应答也可能存在差异。骨痂本身对力学刺激的某种应答机制可能对 cGRP受体的表达产生一定的影响，最终影响骨折的愈合。 第六届《中华骨科杂志》论坛·基础与骨病 因此，本研究拟通过建立不同力学环境大鼠骨折愈合模型，观察骨折端微环境对骨折愈合的影 响，以及力学环境不同对骨折端局部CGRP受体表达的影响。 材料与方法 1．1．实验动物 大鼠笼养饲以标准鼠粮(由北京华阜康生物科技股份有限公司提供)和清洁饮水。 1．2．实验材料 5IIll一次性无菌注射器针头(直径为1mm，碧迪医疗器械有限公司)；金属骨针(长150mm，直 径O．8mm，天津市新中医疗器械有限公司提供)；金属骨针(长150mm，直径l嗍，天津市新中医疗 ELF 型，瑞典)；En(h胍TEc3200力学实验仪器及其配套的wintest生物力学测试软件(Bose公司， Iu订 RealTimePCRDetection 2叭6轮转式切片机)；显微镜(尼康E100型生物显微镜)；iQ5