RACE_cDNA末端快速扩增技术进展.pdfVIP

《生物工程进展》1997, . 17, . 5 V o l N o RA CE : cDNA 末端快速扩增技术进展 明　洪　黄秉仁 中国协和医科大学基础医学院 中国医学科学院基础医学研究所 国家分子生物学重点实验室　北京 100005 　　基因表达水平和模式的变化驱动着生物体 35 的接头[ ( ) ] 为引物反转录总 bp dT 17 adap to r ( ) 内主要的生物学过程。分离和克隆基因是研究 RNA 得到 - cDNA 。引物的接头有一个在基 基因结构、功能以及表达的基础。以往建立和筛 因组DNA 中罕见的限制性内切酶的酶切位 选 cDNA 和DNA 文库来分离克隆目的基因的 点, 这样就在未知的 cDNA 末端接上了一段特 经典方法繁琐而且工作量大。 技术的出现 殊的接头序列。接着, 用一个基因特异性引物 PCR 极大地提高了分离克隆目的基因的效率。反向 ( ) ( ) ( 3 ′ 与少量第一条 链退火 一般 am p cDNA 、锅柄 ( ) 、 ) ( ) PCR PCR Panhandle PCR vecto rette 1ng 并延伸, 产生互补的第二条 + cDNA PCR 、连接介导PCR (L igation m ediated PCR ) 链。然后用 3 ′ 和接头引物进行 循环即 am p PCR 和捕获寡盒介导 ( 可扩增得到 双链。扩增的特异性取决于 PCR Cap tu re O ligocassette cDNA m ediated PCR ) 等PCR 技术为扩增已知序列旁 3 ′ 的碱基只与目的 分子互补。用接 am p cDNA [ 1 ] ( ) 侧的未知DNA 片段提供了捷径 。然而, 这些 头引物来取代 dT 17接头引物则阻止了长 dT 方法实验周期长、费用高, 而且常出现 PCR 扩 碱基引起的错配。 增效率或特异性低等问题。因而利用这些方法 ( 同样的原理可用来获得 cDNA 5 ′末端 图 很不容易得到完整的全长基因, 尤其是基因的