利用Red系统快速改构含鼠beta酪蛋白基因的.pdfVIP

China Biotechnology, 2005, 25( 8): 45~ 50 Red - * 1 1, 2 1 1** 辛艳丽 贾玉艳 王恒梁 邓继先 ( 1 100071 2 712100) 采用 Red系统介导的同源重组方法对含有鼠 酪蛋白基因的 RPCI23440C1B C进行快 速改构首先通 PCR 方法, 获得两端带有鼠 酪蛋白基因同源序列的 tP mZeo 同源重组片 段,然后将此同源重组片段电击转化至已含有编码 Red重组酶质粒的 RPCI23440C1 B C菌中, 在 Red重组系统的帮助下, 通 同源重组片段两端与RPCI23440C1中酪蛋白同源的序列在 菌体内与 酪蛋白基因发生同源重组, 将其置换最后利用 Zeocin抗性基因两侧的FRT 位点,通 FLP位点专 一性重组将抗性基因剔除经 Southern blot和序列分析鉴定表明, 获得了重组正确 且无编码两种重组酶质粒的 tP mRPCI2344