Lentivirus介导分泌NT-3的鼠胚基因工程神经干细胞构建与表达研究.pdfVIP

神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞去补允替代损伤或者死亡的神经功能细胞； ②调节损 伤的局部微环境，促进损伤轴突的功能性再生。植入的工程干细胞能在体内小断地分泌转入的 目的营养因子．这些营养因子能诱导和促进轴突功能性再生，Lu等人将转基因分泌BDNF的骨 髓基质细胞植入损伤脊髓中，一月后检测到损伤轴突再生的数量和生长长度较对照组明显增加， 并且有较多的再生轴突长入损伤脊髓内。③救援脊髓内损伤功能细胞。Lu等向损伤脊髓内移植 转基因分泌BDNF的成纤维细胞，观察到皮质脊髓神经元成活率达89．8-．5．9％；而对照组皮质 脊髓神经元成活率仅为36．2士7．o％。④分泌的神经营养因予能够诱导植入的外源性NSC和内源 性NSC向特定方向分化。新近的研究表明神经元分泌的营养因子，如NT一3、NT一4／5、BDNF 等能诱导NSC向着神经元方向分化；而星形胶质细胞分泌的因予，如睫状源神经营养因子则 诱导NSC向星形胶质细胞分化。综上所述基冈工程NSc有可能在SCI厉损伤轴突再生及功能恢 复的实验研究和将来的临床虑用中起到垒关重要的作用。 通过多种方法检测到了基因工程hNSC的多基因表达；证实了构建基因丁程hNSC是可行的， 向SCI的临床治疗研究迈出了重要的一步：①因为CNS内仍然存在免疫排斥反应，所以用基 因工程NSC来治疗脊髓损伤，最终还得刚归到人类同种NSC；②Lentivirlls能够携带较大 的外源性基因和可以同时携带并稳定表达多基因的特点使得在损伤脊髓内同时获得多种神经营 养因子的高效表达成为可能，本实验也证实构建同时表达多基网的基因丁程hNSC是可行的。 因为各种神经营养因子对SCI后功能恢复的作用机制是币相同的：NGF在SCI后主要促进感觉 传导通路轴突的再生和感觉神经元的存活。从而促进感知觉功能的恢复：BDNF也能促进运动功 能的恢复，但冈为它的受体酪氨酸激酶B(trkB)主要集中在运动神经元胞体上．所以它的 主要功能是通过救援损伤的皮质脊髓神经元而达到促进SCI后功能恢复；NT一3则相反，它的 受体酪氨酸激酶C(trkc)主要集中在轴突上，因而它是通过促进皮质脊髓束再生来促进损伤 脊髓的运动功能恢复。因而在SCI的治疗研究中要想获得较为理想的功能恢复，仅仅依靠单一 的某种神经营养因子的高效表达来促进并获得具有某种功能的轴突的功能性再生是远远不够的， 必须使得具有小同功能的轴突同时获得功能性的弭生，这就需要多种神经营养因子的共同作甩 Lentivirus介导表达多基因的基因T程hNSC可能起到此作用。 到H前为止，该基因丁程干细胞细胞已培养5代。超过2月，仍具hNSC特性并持续稳 定地表达GFP和目的基因NT一3。希望能在进一步的移植治疗中取得良好的结果，为我国在这方 面的基础研究和未来的临床应用奠定基础。 达研冗 蔡培强汤逊林月歌B．BLITS M．OUDEGA阳运康徐林周I王f华 成都军区昆明总医院骨科(蔡培强、汤逊、林月秋、阳运康、周田华lGraduateSchool for Neurosciences InstituteforBrain Amsterdam，Netherlands Research，Amsterdam，The Miami tOCure Netherlands(RBLITS)The ofMiamiSchoolof Project Paralysis．University Medicine，Miami，FL 33101，USA(M．OUDEGA)中国科学院昆删动物研究所(徐林) 基金项目。南省自然科学基金资助项目(2002C0070M) 127 【摘要】 stem 以便为脊髓损伤研究提供材料。方法①培养和鉴定胎鼠神经干细胞(Neuralcell． NSC)；②用携带绿色荧光蛋白(GreenFluorescence