17β-雌二醇对人子宫内膜癌Ishikawa与HEC-1A细胞的增殖及P21ras与P-Erk表达的研究.pdfVIP

46．17 p一雌二醇对人子宫内膜癌Ishikawa 和HEC一1 A细胞的增殖及P2]ras和P—Erk表达的研究 乔玉环黄珊珊郭瑞霞 郑州大学第一附属医院妇产科(450052) 【摘要】 目的观察17 一)细胞的增殖，细胞周期的影响及对丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路相关蛋白P21ras和P—Erk 的表达，初步探讨雌激素通过MAPK通路促子宫内膜癌形成的可能性。方法(1)运用M，I，I法，流 学检测子宫内膜癌细胞中P21 (1)随着E：浓度增加， 和P—Erk的时间效应，浓度效应，两者之间的相关性及与ER的关系。结果 ra$和P—Erk之间均呈正 赖性的特点。(3)不同时间，不同浓度E2作用下，2种子宫内膜癌细胞中P21 雌激素可以促进子宫内膜癌Ishikawa和 关(r≤一0．049，P≤0．030，r≤一0．048，P≤O．032)。结论 HEC—lA细胞的增殖和周期的进展，而且可以通过非转录效应迅速激活子宫内膜癌细胞中MAPK信传 导通路。 子宫内膜癌是女性生殖系统常见的恶性肿瘤，发病率逐年上升。众所周知，无孕激素拮抗的高雌激 素长期作用可增加患子宫内膜癌的风险，但其作用机制尚不十分清楚，除了经典的雌激素受体(estlo— genreceptor，ER)的核转录效应机制外，雌激素还具有非基因转录效应。最近的研究证实雌激素可激 活子宫内膜癌细胞磷脂酰肌醇3激酶(phasphatidylinositol一3 ted kinases，MAPK)通路，从而促进子宫内膜癌细胞的增殖，国内鲜见报道。本文研究了雌激 protein P21瑚和P—Ed【的表达，从而初步探讨针对雌激素对MAPK通路活化和治疗子宫内膜癌的可能性。 l材料与方法 1．1细胞及试剂 实验室魏丽惠教授馈赠。17 Cruze公司 产品，鼠抗人P21ras单克隆抗(工作液)购自福州迈新生物技术公司。 1．2细胞培养 ．．一234．．—． 链霉素IOO 漂洗，0．25％胰酶用于细胞消化，制成细胞悬液，根据细胞生长状态每1—3天换液或2—3次／周传代。 1．3细胞增殖率测定 孔板中，37℃、体积分数5％CO：：培养箱内孵育24h，细胞贴壁后，无血清培养24h，使细胞同步化。 h和72h终止反应，每孔入 10。6mol／L和10‘4mol／L的E2。每组设六个复孔。分别于加药后24h、48 h，再加入DMSO M，I-Il(5斗g／m1)20“，37。C孵育4 200山，轻轻振荡，用酶标仪测定每孔吸光度 (OD)值，测定波长492nln，参考波长570rim。 1．4细胞周期测定 将对数生长期的2种细胞贴壁后于无血清基中培养24h，分别加入0 LE：，24 过夜后，加入RNA酶至终浓度为50 rain，加入PI至终浓度为50 mg／L，37％消化30 mg／L，4。C存放 30min以上，流式细胞仪上检测。 1．5免疫细胞化学染色 将对数生长期的细胞计数后以5×105／孔的密度接种于内置玻片的六孔板中培养，贴壁后于无血清 终止培养，取出玻片，PBS简单冲洗，4％多聚甲醛固定30min，按SP试剂盒说明染色。每次实验均设 不加一抗(PBS代替一抗)的阴性对照。用已知阳性切片作阳性对照。光学显微镜下观察并判断结果： P21ras阳性细胞为胞质出现棕黄色颗粒，P—Eric阳性细胞为胞质或胞核出现棕黄色颗粒。选择细胞均匀 清晰的视野观察，在每个组观察1000个细胞记录其中的阳性细胞