限进填料及其在生物样品分析中的应用.pdfVIP

限进填料及其在生物样品分析中的应用 tt十11精$¨i荣”1目驶‘谢华2郭志*。 兰州$E兰州总Ⅸ院田家药物临床药4试验基地，=¨730050； 2兰州大学药学院．兰州，730000) I前盲 进行复杂生物基质混合体系样品(如血清、血浆、尿液等)分析时．由于样品基质复杂、 被测物浓度低．在进行分析前必须对样品进行前处理．使得待ai物得以分离和纯化。样品的 前处理直接影响分析结果的准确度和精密度，是整个生物样品分析过程中的限速步骤和瓶颈 步骤。常规的蛋白质沉淀(proteinprecipitation，PP)是最快速、简使的样品制蔷方法，但 其选择性低，存在未沉淀完全的内源性生物基质，同时对部分待测物会发生与蛋白质的共沉 extraction，LLE)、固相萃 键而导致信号衰减”】；常用的萃取技术如液渍萃取(1iquld-liquid extraction，SPE)、膜萃取等一般在离线状态下进行，操作繁琐、耗时费力、 取(solidliqmd 耗费试剂、用样量大、准确度和精密度不高、无法测定结构不稳定药物的含量Ⅲ。因此，快 速、准确、选择性高的新型色谱填科的研制成为了体内药物分析方法研究的一大热点。在这 些壤科中，限进填抖(r训m出嗽∞smme^m，RAM)受到了很大的关注。 RAM也称为限制进入固定相(resldcted-accessstationary．R^s)或限制进入吸附剂 (restored-access sorhent．RAS)或浸透限制固定相(mstrlcted．access stationa叫phase)等， 由1991年Desilets等引入”l，是用于全自动化样品预处理的在线萃取技术之一。本文就艰进填 料的萃取原理及结构类型、分离模式以及在生物样品在线分析中的应用进行了综述。 2限进填料的革职分离虮理厦分类 RAM为一个填抖家族，有着不同的结构类型，但它们的分离机制都是相同的。如图l 所示，这类填料同时兼具针对大分子的体积捧阻功能和针对小分子分析物的萃取功能，通过 控制填料合适的孔径和对填料的外表面进行适当的亲水性修饰，使得生物样品溶}痘中的大分 子不能进入到吸附剂的内孔中去，且亲水性的外表面保证了生物太分子在填料的外表面不会 发生不可逆的变性和吸附．这样大分子物质在死体积或近于死体积的情况下被洗脱除去：而 该类填料的内孔表面Ⅲ4仍为反相苹取剂或离子交换萃取剂性质，特涮物通过琉水作用和静电 作用被保留[41． 卅· 像’皇一¨—点鬻。。 ”-～Ⅲ“ 斟 ‰Proteins 目Im《*#Ⅱ#it口‘i ：：：象黥?：i勰哿罗；耋j：繁擎!嚣嚣谧3嚣裟。。。…。。。。 279 按蛋白排阻机制不同RAM可分为以下二大类：具有物理和化学屏蔽的RAM，具体包括：(1) 内表面反相填料，(2)烷基二醇硅胶填料，(3)键合相多孔硅胶填料，(4)半渗透表面填料， (5)蛋白涂渍硅胶填料，(6)混合功能填料，(7)屏蔽疏水相填料。具体应用如下： 2．1具有物理屏蔽的RAM 2．1．1 内表面反相填料(ISI心) 定血清和血浆中的小分子药物而专门设计制造。该限进填料由粒径为5I．tm：tL径为8姗的多孔 硅胶颗粒构成，颗粒内表面覆盖有能够限制蛋白质吸附的亲水部分(二醇．甘氨酸残基)，而 疏水三肽部分(甘氨酸．L．苯丙氨酸．L．苯丙氨酸，GFF)只存在于内表面。小分子物质能够 进入内孔并与内表面的疏水基团反应而得到保留。而大分子物质不能进入到内孔中去，也不 会与具有亲水性外表面的硅胶发生变性吸附，而在死体积或近于死体积的情况下被洗脱。 该类填料可对分子量大于20000的大分子物质产生体积排阻功能，而对小分子物质的保 留机制主要是兀-7c电子作用和三肽中苯丙氨酸残基的弱阳离子交换作用17J。内表面反相填料 可经受多达几百次总计大约为7mL