第三部分+持续性低剂量率照射CL187细胞周期与凋亡研究.pdfVIP

第三部分弟二鄙分 持续性低剂量率照射CLl87细胞 周期和凋亡研究 前言 凋亡又称程序性死亡，是肿瘤绍胞死亡的主要机制之一”。?!。诱导塌亡是肿瘤治疗的重要方 式，凋亡往往伴随细胞周期阻滞而来。大多抗癌药物和基因免疫治疗以肿瘤细胞核酸为靶点，通过 控制或阻断细胞周期的动态过程起作用，具有很强的周期时相性。然而，’CLDR下肿瘤细胞周期和 凋亡的研究国内外报道较少，探讨CLDR下肿瘤细胞凋亡和周期时相的变化将为CLDR和其它肿瘤‘治 疗方式的结合，提高肿瘤综合治疗疗效提洪新的契机。“乱一。 一．材料与方法 (一)材料和试剂 CLl87人大肠癌细胞系 北京肿瘤所提供，购自ATCC 普通RPMI一1640培养液 Gibco分装(含青霉素1001U／ml， 谜霉素lOOmg／m1) 胰蛋白酶 中科院动物所 EDTA 中科院动物所 胎牛血清 杭州四季青公司 ’： Annexin—V凋亡试剂盒 北京宝赛生物技术公司 35mm培养皿 晶美公司 60mm培养皿 品美公司 lOOmm培养皿 晶美公司 15ml培养瓶 晶美公司 lml离心管 晶美公司 15ml离心管 北京四环 50ml离心管 北京四环 (二)主要仪器 比jI放射源 宁波君安药业科技有限公司 CLDR放射生物学模型 ：比京大学第三医院 “Co Y射线照射源 北京大学医学部钴源室 C0。细胞培养箱 德国}teraeus 高速低温离．c,：tJL 德国}!eraeus 冰箱 HaieI’Bc{卜2：j8青岛海尔 一80℃冰箱 ：{匕京长安科学汉器厂’ 电热恒温水浴箱 北京长安科学仪器厂． 超净台 北京半导体仪器一厂 倒置显微镜 重庆光学仪器厂 TNlOOB型托盘式扣力天平 上海第二太平仪器厂 TG332A微量分析天平 上海太平仪器厂 96 流式细胞分析仪 美国BD公司 荧光显微镜 美国Beckman公司 (三)实验方法 将细胞分为空白组和≈jI低剂量率照射组。照射组又分三组，以2．77cGy／h的初始剂量率分别 给予2、5、lOGy的照射，照射后孵育48小时后，消化细胞。 1．荧光显微镜观察凋亡细胞i髟态 ， orange，AO)，溶于lOOml浓度】％的PBS中， 制各吖啶橙染色液：称取|mgⅡ丫啶橙(Acridine 涅匀，避光保存。 将空白组和芷。I照射组细胞消化成5×10。细胞／m】，拿载玻片两张，将消化好的两组细胞用微 量取样器吸取后分别滴一滴到载玻片上，然后用滴管加上配制好的吖啶橙染色液。盖玻片覆盖，后 直接到荧光显微镜下观察，照相““。