东方巴贝斯虫线粒体基因的测序和细胞色素b基因的研究.pdfVIP

东方巴贝斯虫线粒体基因的测序 与细胞色素b基因的研究 张颖，周艳琴，姚宝安。赵俊龙 (华中农业大学／农业微生物国家重点实验室，武汉430070) 摘要：对东方巴贝斯虫(Babesiaorientalis)的线粒体基因进行克隆和洲序及序列拼接，通过与牛巴贝斯 虫线粒体基因的比对获得东方巴贝斯虫细胞色素b基因，并以此为基础构建东方巴贝斯虫细胞色素b的 系统发育树。应用EST序列分析结果和电子克隆结果，采用PCR技术，扩增东方巴贝斯虫线粒体基因，将 b，cym)基因的系统发育树。结果表明：东方巴贝斯虫线柱体基因与牛巴贝斯虫线粗体基因的同源性高达 87％，细胞色素b基因的同源性也达到了89％；根据系统发育树的结果，显示东方巴贝斯虫属于小巴贝新 虫种，与吉氏巴且斯虫的亲缘关系最为相近。最后鉴定所获得的序列即为东方巴贝斯虫线粒体基因和细 胞色素b基因。大小分别为5157bp和714bp。 关键词：东方巴贝斯虫；线粗体基因；细胞色素b基因；系统发育树 东方巴贝斯虫(Babesiaorientalis)属于顶复门孢 然而，迄今为止，对寄生虫mtDNA的了解仍然 子虫纲梨形虫目的巴贝斯科巴贝斯属，是1997年刘钟少m日，而在原虫领域，有关线粒体相关基因的研究 灵等确认的—个新种，是一种经镰形扇头蜱传播的重 对而言则是越来越多，原虫的线粒体也越来越受到 要血液原虫，主要引起水牛巴贝斯虫病”I。该病在我国 视p．‘”，尤其是对于顶器门的原虫，其线粒体与原 长江以南许多省份发生和流行，临床上患病牛以高热、 侵袭过程中的相互作用已经成为研究寄生虫侵袭机 贫血、黄疽和血红蛋白尿等为特征，甚至引起死亡，造 的一项重要的研究之一【邺。目前顶器门寄生虫中 成重大的经济损失。传播媒介蜂为镰形扇头蜱 很多如恶性疟原虫、问日疟原虫、伯格氏疟原虫等十 种虫种的线粒体已经获得了全长，还有少数梨形虫j (Rhipieephalushaemaphysaloides)，此蜱为三宿主蜱， 一年发生一代，成虫越冬。次年成虫最早三月中旬(福 牛巴贝斯虫、小泰勒虫等也获得了全长，均为6Kb左茄 建)或四月中旬(湖北省)，持续到七月中旬消失。 呈线性结构，更多的原虫只获得了部分序列R10,曲 线粒体DNA(mitochondrionDNA，mtDNh)是广泛 毫无疑问，mtDNA在研究寄生虫，尤其是对人畜具 存在于各类真核细胞内的最复杂和最重要的细胞器之 严重危害性的寄生虫方面有较大价值EI。 一，除成熟红细胞外，线粒体普遍存在于有氧呼吸的真 核细胞的细胞质中，是细胞进行氧化磷酸化的场所，并 1材料与方法 拥有独立的遗传物质——线粒体基因组日。 1,1材料 mtDNA的进化速度明显快于核DNA．而且由于它1)实验动物 属母系遗传，基因重组发生率极低，故其序列的变化可 自水牛巴贝斯虫病非疫区购回4头水牛犊，分 反映生物种群内和群体间的遗传变异。因此mtDNA可编为1、2、3、4号。使用前7天左右手术除脾．耳静脉 作为研究寄生虫进化的理想工具目。有学者研究了曼 片姬姆萨染色及半巢式PCR检查无血液原虫寄生， rRNA 氏血吸虫(sm)非洲株和美洲株之间线粒体16S 无蜱的条件下饲养。1．2号为阴性对照组，3、4号为 的微小变异，并用限制性酶分析了它们的mtDNA，经 验组。蜱是采自水牛巴贝斯虫病疫区，刚上牛身的饥 系统发育分析的结果支持美洲株Sm是在几百年前由 镰形扇头蜱成蛑。 非洲株sm传至美洲的假说H。 2)试验试剂 ·58· dN口l