超速离心法在生物大分子相互作用研究中得应用.pdfVIP

中国化学会第八届全国应用化学年会 西安 20039 垒：墅 超速离心法在生物大分子相互作用研究中的应用 林元喜1 王治伦2 于林3 (西安交通大学医学院1病生教研室；2地方病研究所；3实验中心，西安710061) 生物大分子是生物体内的一些结构复杂、分子量巨大的高聚物分子，包括蛋白质、核酸、多糖等。 它们的许多功能是建立在特定相互作用的基础上的。近年来，核磁共振(NMR)、质谱O订s)技术在生物 大分子结构和功能的研究中取得了举世瞩目的成就，但科学家对用沉降法研究生物大分子的特性仍然很 感兴趣，生物高聚物的沉降系数和分子量的浓度依存性以及在不同溶液件下，如温度、离子强度、pH、 压力环境改变等对生物大分子的空间构型和改变，相互作用间的关系的研究同样取得了长足进展。 分析超速离心机能够直接测量分子量从数百到数百万道尔顿范围内生物大分子的沉降系数(s)、扩 散系数(D)、分子量(M)，采用相应的数值分析方法，能够检验样品的均一性，检查和表征大分子的 构型及构型改变，确定亚单位的化学计量，表征大分子复合物的组装和拆卸机制，测定缔合系统的缔合 常数，热力学参数(PH活度系数)，流体动力学非理想性(如Vkrial系数)等。 分析超速离心研究生物大分子相互作用主要有实时测量法和离心后分析法。实时测量法包括沉降速 度法，沉降平衡法、示踪沉降平衡法等。它是在离心过程中借助光学系统(包括吸收法和干涉法)。实时 测量转动转头中大分子的沉降行为，其优点是准确快速，获得数据精确度高。Beckman仪器公司研制的 XL—A和XL-1分析超速离心机在数据采集及数据处理方面有了很大进步，再加上近年来计算机程序构建 用于分析自缔合系统的平衡缔合常数等等。极大地扩展了分析超速离心法在表征大分子物质特性方面的 应用。 离心后分析与实时测量不同，大分子溶液在制备超速离心机里进行离心，常用角转头，获得沉降平 衡后分级分离，可用同位素，酶活性等方法确定浓度分布，再转换到实际离心场中的半径浓度关系，结 合不同模式进行分析。主要用于不宜实时测量的大分子相互作用，如光吸收特性不明显，膜蛋白分子量 测定等。由于检测方法灵活，扩大了大分子分析的浓度范围和分析种类，是分析超速离心的重要补充。 超速离心法研究生物大分子相互作用的基本类型主要涉及同类大分子自缔合，蛋白质．质白质相互作 用，蛋白质一核酸相互作用，蛋白质，多糖相互作用，核酸．核酸相互作用，小分子配体与蛋白质之间的相 互作用等。这些大分子之间及其与小分子之间的相互作用形式多种多样，按亲和力的大小可分为强相互 作用、中等相互作用和弱相互作用，离心法已建立了研究各种相互作用的分析模式。由于离心法是在同 一体系中研究相互作用，不会产生象电泳、色谱等方法在相互作用过程中由于分子迁移引起浓度变化使 已形成的平衡体系遭到破坏，离心法在研究中等强度和弱相互作用中具有很强的优势。 在受体研究中，可以确定慢沉降的游离配体与快沉降受体的结合动力特性，是一种相对快速的热力 学方法，在相当大的浓度范围内研究受体、配体结合的因果关系。研究酶与底物，离子与蛋白和核酸之 究表明，Translin是一个八倍体的椭球形结构，一个八倍体结合一个单链寡核苷酸，同时也测定了它们 间的解离常数。E．coli 下UvrD自缔合成二聚体和四聚体，并测定了平衡常数。还有更多的研究结果表明，分析超速离心法在 我们揭开生命奥秘过程中起了举足轻重的作用并将发挥更大的作用。 A．56 应用化学新进展——天然资源利用和精细化学品 参考文献 1 Schuck R．BiophysicalJo“mm，20ff2，82(2)：1096-1111 P．，PeraginiM．A，GoraalesN 2林元喜，王新风中国病理生理杂志，2(102，17(13)：1811—1812 3．林元喜，马志义，尚宁宽等中国病理生理杂志，2002，17(10)：110-111． 4．LeeS．E，FuinrE，LewisMS，et a1．Biochemisuy．200l，40(46)：14081—14098 5林元喜，王治伦，于晓江等．中国地方病学杂志，2003，22(5)：108—110． 6MalufN K．LohmantM JournalofMolecualrBiology．2003，3