高不饱和脂肪酸对离体大黄鱼头肾巨噬细胞营养生理及免疫力与影响.pdfVIP

crocea)头肾 高不饱和脂肪酸对离体大黄鱼(Larmichthys 巨噬细胞营养生理及免疫力的影响 摘要 本研究借助离体细胞培养技术，研究高不饱和脂肪酸在鱼类免疫应答中的作 用，回答有关高不饱和脂肪酸对鱼类免疫调控的部分机制问题。主要研究内容包 离体大黄鱼头肾巨噬细胞营养生理及免疫力的影响。(3)二十碳五烯酸(EPA， 及免疫力的影响。主要研究结果如下： (1)通过优化Pcrcoll密度梯度离心技术，从大黄鱼头肾组织中分离纯化巨噬 细胞，并优化细胞培养条件。对所分离细胞进行形态学分析、普通光镜和电镜超 微结构观察以及细胞功能验证实验。实验结果表明：相比34％／51％Pcrcoll梯度 分离液，31％／45％梯度的Pcreoll分离液分离巨噬细胞效率更高。经瑞氏．吉姆萨 染色分析，初分细胞中巨噬细胞／单核细胞的比例高达42％，过夜培养后使细胞 贴壁，冲洗掉未贴壁细胞，在所形成的细胞单层中，巨噬细胞／单核细胞的纯度 可达到90％以上。细胞单层分别置于18℃、22C以及26C无C02恒温培养箱中， 培养的细胞活力显著高于其他温度条件。普通光镜和电镜观察到大黄鱼头肾巨噬 细胞具有伪足发生和较强的吞噬能力、胞浆中富含线粒体以及吞噬小泡。当施加 LPS刺激后，细胞呼吸爆发活性随LPS浓度以及孵育时间变化而变化。孵育3h 后，LPS协同PMA可诱导巨噬细胞超氧阴离子(02‘)的产生。然而，孵育24h后， 细胞产生较多的一氧化氮(NO)。 实验结果表明，细胞活力随着ARA浓度的升高以及孵育时间的延长而下降，尤 过氧化物的生成(P0．05)。细胞吞噬能力随ARA浓度的升高呈先上升后降低的 成量(火O．01)，但是其浓度的增加并不随ARA浓度的改变而变化。细胞培养上 量却无显著影响，且处理组培养液中IL-1B的浓度都处于一个较低的水平(约 6pg／ml左右)。 1000pM)以FA．BSA的形式添加到培养基中，孵育一定时间。实验结果表明，细 胞活力随着EPA或DHA浓度的增大以及孵育时间的延长而下降，分别孵育24h 脂质过氧化物的生成量均与对照组无显著差异。巨噬细胞的吞噬能力随EPA或 DHA浓度的升高呈先上升后下降的趋势，5p．M的DHA显著提高细胞的吞噬能 力(尸0．05)，而高浓度的EPA或DHA(200 J．tM和1000pM)显著抑制了其吞噬能 则显著抑制了02。生成量(氏0．05)。EPA或DHA显著抑制了大黄鱼头肾巨噬细胞 影响，且培养液中K-1B的浓度都处于一个较低的水平(约6pg／na左右)。 本研究首次利用大黄鱼头肾巨噬细胞体外模型研究ARA、EPA或DHA对离 体巨噬细胞的免疫调控作用。ARA、EPA或DHA可以显著影响离体细胞的部分 ¨ 生理指标和免疫指标，其表现出的免疫调控特点与高不饱和脂肪酸浓度、作用时 间以及脂肪酸种类密切相关。同时也证明，鱼类细胞培养技术可以应用于脂肪酸 营养免疫的研究，有助于阐明脂肪酸调控鱼类免疫力的部分机理。 关键词：大黄鱼；高不饱和脂肪酸；离体；细胞培养；巨噬细胞；免疫 Effectsof unsaturated acidsonnutritional highly fatty and of isolated physiology from immunity macrophages large yellow croaker(Larmichthyscrocea)head