简并寡核苷酸引物PCR扩增单细胞基因组的影响因素研究.pdfVIP

维普资讯 安徽农业科学，Journal0fArdatfiA ．Sci．2008。36{16)：6675—6677 责任编辑 郑丹丹 责任校对 张敏 简并寡核苷酸引物 PCR扩增单细胞基因组的影响因素研究 王晶，乔龙，孙海翔2*，胡娅莉3，李洁4，李朝军5(1．南京师范大学生命科学院，江苏南京2l0046；2_南京市鼓楼医院生殖中 心，江苏南京210008；3．南京市鼓楼医院妇产科，江苏南京210008；4．南京市鼓楼医院遗传室，江苏南京210008；5．南京师范大学分子医学生物技术江苏 省重点实验室，江苏南京210046) 摘要 [目的]研究影响简并寡核苷酸引物聚合酶链反应 (de m oligonucleotidep血划 P( ，DOP-mR)扩增单细胞全基 因组的因素。 [方法]以单个人外周血淋巴细胞为材料，进行DOP-PCR，研究新鲜细胞与冷藏细胞及采用新鲜和冻存 的细胞裂解物为模板对扩增产物 的均匀性及特异性的影响。[结果]以新鲜的淋巴细胞为模板与以冷藏的淋 巴细胞为模板相比 ，扩增产物的均匀性相 当，特异性上新鲜 细胞较好。细胞裂解后立即进行扩增的效果在产物的均匀性及特异性方面均明显优于冻存的细胞裂解物。[结论]对单细胞应用DOP- PCR方法进行全基因组扩增时，应尽量选取新鲜细胞进行裂解，裂解后避免冻存以保证扩增的均匀性及特异性。 关键词 单细胞；简并寡核苷酸引物PCR；基 因扩增 ；全基因组 中图分类号 Q789 文献标识码 A 文章编号 0517—6611(2oo8)16—06675—03 ontheFactors nu啦 theWholeGeaomeAl唧蛐 粕 aSingleCell I)eger~ te 棚ld鼬 n缸盯edH WANG J etal (SchoolofLifeScience，N{InjingNormalUnivers ，N~jing，Jian~ 210046) -ct [Objective] p山p0sewastostraythefactorsinfluencingthewhole r黼 amplificationfromasidlecellbyde窘eI oligonueleotide primreedPCR(DOP-PCR)．[Method]Withperipheralbloodlmoho~eofanindividualpersonasmaterial，theDOP-PCRamplificationwasconducted tostudytheinfluencesofusillg五resI1andrefrigeratedlj佃pI】0cytes，andfreshandfrozencIackiIlgproductsfromb佃pI】0cytesastemplatesontheuniformity andspecificityofamplificationproducts．[Result]Tneuniformityofamplificationproductswithfreshlympbecytesastemplateswas tothatwiht 一 frigemtedlymphocyt~astemplalesandhteirspecificitywasbetter．Comparedwiht 嘲 a陷ckingproducts nly瑚 l0I1ytes，theeffectsofnilmediate amplificationaftercellcrackingw significantlybetterintheuniformiytandspecificiytofproducts．[Conclusion]WhenDOP-PCRmethodwasapplied inhtewholegenomeamplificationfromasinglecell，itwasbettertoselectfreehcellsforcrackingandhte如 enstorageshouldbe avoidedafterdackiI唱 soastoen目lrehteuniformiytandspecificiytofarr~lification． Keywolds Singlecell；D罐p脚 teoligmucleotideprinaeredPCR；Geneanaplifieat