大孔树脂纯化白芍总苷研究.pdfVIP

质量与化学 大孔树脂纯化白芍总苷的研究 蔡一杰，金传山，昊德玲，张伟 (安徽中医学院，安徽省现代中药重点实验室，安徽合肥230031) 摘要 目的：筛选影响白芍总苷分离的主要因素。方法：用大孔树脂吸附分离纯化自芍总 苷，选用了均匀设计法，对洗脱工艺参数进行优选。结果：最佳上柱工艺为药液浓度lg生药材 ／mI，2倍树脂量吸附，柱径高比为1：12，吸附时间30min结论：大孔树脂可较好地富集白芍 中的总苷，其膏中总苷含量达60％以上。 关键词 自芍总苷；均匀设计；大孔树脂 白芍为毛莨科植物芍药尸粥o”缸fc配ff7勋，口P础．的干燥根。味苦、甘、涩，性微寒。具有平肝止 痛、养血调经、敛阴止汗等功效。白芍中含有的主要有效成分为芍药苷、芍药内酯苷、氧化芍药苷、 苯甲酰芍药苷等，统称为白芍总管(TGP)l¨，而白芍总苷为白芍药材的主要活性成分。本文以白芍总 苷含量为考察指标，考察了AB．8型大孔树脂纯化白芍总苷的工艺研究。在纯化白芍总苷的最佳上柱 工艺过程中，本实验的预试表明药液上样浓度，树脂柱径高比，吸附时问这三个因素为影响纯化的 效果的主要冈素，这些因素在考察过程中应设多个水平考察更加全面，结果更加可靠。均匀设计使 三因素多水平实验的每个试验点有充分的代表性，因此采用均匀设计优选最佳上柱工艺。 l仪器与材料 自安徽毫州协和成药厂药材生产基地，经安徽中医学院中药资源与利用教研室金传山教授鉴定为毛茛 科植物芍药尸咖行细船咖，口P觚，的干燥根。AB．8型大孔吸附树脂(天津光复精细化学研究所)，苯 甲醇(上海振兴化工一厂，色谱纯)，水为重蒸馏水。 2方法与结果 2．1上柱溶液的制备 称取白芍饮片loog，打碎成粗颗粒，以70％乙醇加热回流提取两次，第1次加8倍量回流提取 60mill，第2次加6倍量同流提取30mirI，过滤，合并滤液，回收乙醇至无醇味，加水定容至一定体积， 即得上柱溶液。 2．2白芍总苷含量测定方法 2．2．1色谱条件 色谱柱：SHIMADZU(VP．0DS (86：14)；流速：1．Oml．miIl一；检测波长：230衄；进样鼍：20“I 2．2．2对照品的制备 精密称取3．55mg苯甲酸对照品，置100ml量瓶中，加流动相定容至刻度，摇匀，即得浓度为 35．5岭．m1．1的苯甲酸对照品溶液。 2．2．3样品的制备 ．391． 中华中医药学会中药炮制分会2008年学术研讨会论文集 的盐酸调节PH值呈弱酸性，用流动相定容至刻度，摇匀，过滤，取续滤液，即得。精密吸取该溶 液20ul，注入色谱仪，用外标法计算出苯甲酸的含量，再由公式：白芍总苷含量％=苯甲酸含量％ ×480．27／122．12，计算得出白芍总苷的含量【2J。 2．2．4线性范围的考察 苯甲酸峰面积积分值分别 35．5嵋．ml-1。按上述色谱条件进样20山对照品进样测定苯甲酸峰面积， 绘 范围内，苯甲酸的含量与峰面积呈良好的线性关系。 2．3白芍提取物的分离纯化 2．3．1树脂的预处理 AB．8型大孔树脂用乙醇湿法装柱，用乙醇在柱上流动清洗，不时检查流出的乙醇液，至乙醇液 与水混合(1：5)不出现白色浑浊为止，然后以大量蒸馏水洗去乙醇至无醇味。 2．3．2最大上样量的考察 采用薄层层析法确定最大．卜样量，展开剂为氯仿一甲醇．水(30：10：1)，显色剂为0．5％硫酸香草 醛溶液。以上样后检测流出液体显色无芍药苷斑点为最大上样量 表l最大上样量测定结果 注： ‘‘+”表示TLC呈阿1性，“-，’表示TLC呈阴性。 2．3．3洗脱溶剂的确定 乙醇浓度对洗脱效果有较大影响， 乙醇浓度过低，有效成分不能被洗脱或解吸较慢造成洗脱剂 用量过大；乙醇浓度过高，易造成洗脱时流速减慢且增加生产成本。以30％，50％的乙醇洗脱时，收 集到8BV(倍柱体积，以下同