丹参对冷应激犬心功能保护作用研究.pdfVIP

4．5生长基质 欧阳五庆在培养山羊乳腺上皮细胞时，发现乳腺上皮细胞的生长依赖于生长基质H1。李震 等用未铺胶原的培养瓶培养乳腺上皮细胞，结果细胞很难贴壁拍1。这些结果与本研究结果有差 异。本试验证实小鼠乳腺上皮细胞可以生长在不铺生长基质的塑料底物上。 5结论 本试验采用胶原酶分阶段消化法分离乳腺细胞，在试验范围内得出：基本培养液(含 II lI DMEM／F12，10％小牛血清，双抗)中添加10g／ml的表皮生长因子和5g／ml的胰岛素，对 细胞进行培养，可以使原代小鼠乳腺上皮细胞在不铺生长基质的塑料培养皿上生长。 原代乳腺上皮细胞的培养受多种因素影响，包括动物本身，如动物种类、动物个体差异、 动物所处的不同时期，另外还包括试验方法，如消化液成分、培养液成分等。目前原代乳腺细 胞的培养方法还不十分成熟，需要进一步的摸索和尝试，以便为其在用动物克隆技术制备乳腺 生物反应器中的广泛应用奠定基础。 丹参对冷应激犬心功能的保护作用研究 李云章’，于江江，尹文文，徐大伟，石丽华 (内蒙古农业大学动物科学与医学学院， 呼和浩特010018) 摘要：为验证丹参对冷应激犬心功能作用，将试验犬低温冷冻，制造冷应激模型，一组皮下注射丹参注 射液，另一组不做任何处理，采用分光光度法和放射性免疫法对各组试验动物进行血清或血浆中LDH、CPK、 功能损伤，皮下注射丹参注射液可有效地缓解冷应激对心功能所造成的损伤；这种治疗作用与丹参调节冷应激 关键词：冷应激；心功能：丹参；犬 应激(stress)是机体对各种刺激所产生的一种非特异性应答反应。劣性应激可引起畜禽生产 性能下降，诱发多种疾病，甚至造成死亡。寒冷是北方动物最普遍的应激原之一，由此引起的 ‘作者简介：李云章(1956．)，男，蒙古族，博士生导师。邮箱：liyunzhan91956@163．com 390 直接和间接经济损失是制约北方畜牧业发展的重要因素，研究动物冷应激发生机制，探索科学 的应激监测方法，对提高应激预防水平，保障畜牧业发展有重要意义。机体生化指标的变化是 冷应激反应关注的焦点，以往研究主要集中在能量和物质代谢及应激激素，而冷应激对具体脏 器功能影响的研究，目前缺乏系统的文献报导。本试验主要研究了冷应激对心功能的影响，皮 下注射丹参作为治疗组，初步探讨了其对冷应激所造成心功能的损伤的治疗作用机制，对预防 和治疗冷应激有重要的实践指导意义。 1动物模型建立 健康成年土种犬16只，雌雄各半，体重12士-0．5Kg。动物买回后适应性饲养2个月。试验 前2周饲养于20-a：3。C的环境中。试验前随机分为冷应激组和冷应激治疗组，并于左前肢桡静脉 处剪毛。冷应激前将犬全身用4℃冷水打湿，立即放到．18+1℃，风速2级的外界环境之中，持 续3h，造成急性冷应激。冷应激结束后放到20℃的环境中饲养，冷应激治疗组立即皮下注射丹 参酮IIA磺酸钠射液，8h和16h后再注射两次。两组分别在冷应激后1、3、6、12、24、48、 冰箱中保存。 2材料与方法 2．1材料 LDH试剂盒：北京玛诺生物制药有限公司；CK-MB试剂盒；北京玛诺生物制药有限公司； TU-1901双光束紫外可见分光光度计：北京普析通用仪器有限责任公司。 2．2方法 2．2．1血清LDH活性的检测 (1)试剂的组成与配置 R1：NAD，浓度6．5mmol／L R2：Tris缓冲溶液(PH 52mmol／L取一定量的试剂一加入一瓶试剂二中，轻轻摇动，并倒置几次，完全溶解后即为工作 液，工作液保温至37C。 (2)操作步骤 采用紫外分光光度法，340nm波长，反应温度37C。按下表所示的操作程序进行LDH活 性的测定。 391 表l LDH测定加样表 混合均匀，在反应温度保温30s钟，读取初始吸光度，同时开始计时，在精确1，2，3min时， 分别读取吸光度，确定每min平均吸光度变化(么A／分) (3)计算方法 LDH—L(U／L)=(么A样品／分一么A空白／分)xF F=面鬲V丽t×1。00=8095 (4)数据处理 试验结果数据采用X士S表示，