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基于包膜蛋白结构优化的丙肝疫苗研究 戚中田 第二军医大学微生物教研室，上海，200433 Cvirus，HCV)是带有3．合成肽疫苗。主要是包膜蛋白E2中的 丙型肝炎病毒(hepatitis 包膜的正链RNA病毒，主要经血液传播，引起急、 HVRl表位合成肽，免疫黑猩猩仅能抵抗同株病毒 慢性丙型肝炎，并可导致肝硬化和肝细胞癌。目前 的感染。还有T细胞表位合成肽，免疫小动物能诱 全球HCV感染者约有1．7亿，每年新增感染者有导针对该表位的细胞免疫应答。 4．DNA疫苗。以编码HCV结构或非结构蛋 300～400万，我国的HCV感染者近4000万。 HCV感染的慢性率高达70％以上，至今尚无有确白的真核表达质粒作为疫苗，免疫小动物、黑猩猩， 切保护作用的疫苗问世，迫切需要发展有效的疫苗 能诱导抗体和细胞免疫应答，在黑猩猩的病毒攻击 预防和控制HCV的感染和传播。 试验表明，HCV包膜E2蛋白DNA疫苗具有一定 一、HCVE2蛋白与CD81结合可致B细胞异保护作用，能延缓发病，但不能预防感染。 常激活 5．重组病毒载体疫苗。如编码HCV结构或非 HCV的基因组编码三种结构蛋白(核心蛋白结构蛋白基冈的重组腺病毒、痘病毒等，黑猩猩试验 C、包膜蛋白E1、包膜蛋向E2)和七种非结构蛋白表明这些病毒载体疫苗能诱导抗体和细胞免疫应 答，对于延缓发病有一定作用，但不能预防感染。 (p7、非结构蛋白NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A、 NS5B)。E1和E2均为高度糖摹化的蛋白，二者以6．其他类型疫苗。还有以细菌为载体，或者以 非共价结合的异源二聚体形式存在，存在于病毒包 植物为表达系统的疫苗，在抗原构成方面与其他类 膜上，介导HCV对靶细胞的感染。HCVE2蛋白 型疫苗相似，以进行小动物免疫试验为主。 中有11个N糖基化位点，具有良好的免疫原性，免 二、基于E2包膜蛋白结构优化的丙肝疫苗 疫小动物或绒猴，能诱导高水平抗体应答。但为何 人细胞膜七的CD81分子为四次跨膜索家族成 该蛋白在人和黑猩猩仅能诱导有限的抗体应答呢? 员，有两个胞外环，与细胞的活化、增殖等生物学功 最近的研究表明，这很可能与HCVE2蛋白能结合 人或者黑猩猩的CD81有关：E2蛋白与CD81分子，共同构成Ⅱ型补体受体复合物，该复合物与B细胞 结合改变了B细胞激活的正常信号转导通路，导致 受体(BCR)共同参与B细胞活化的信号传递。B细 B细胞活化的阈值显著降低，致使B细胞异常激活 和增殖紊乱，这可能就是HCV包膜蛋白疫苗失保 与抗原的双重结合信号，其中，BCR与抗原分子中 护的重要原因之一。 目前国内外有关丙肝疫苗的研究主要有以下几 E2蛋白与CD81分子 类： 解片段C3d结合)。而HCV 的大胞外环结合，能改变B细胞激活的正常信号转 1．HCV包膜蛋白El／E2异二聚体、E1蛋白或 E2蛋白疫苗。Chiron公司在哺乳动物细胞重组疫导通路，导致B细胞异常激活。由此可见，天然结 苗方面做了大量研究，作为预防性疫苗已进行黑猩 构的E2蛋白可能并不适于用作疫苗靶抗原。 猩试验，具有部分保护作用，但总体保护作用较低。 我们构建了E2蛋白突变体，该突变体不影响 作为治疗性疫苗对HCV感染者进行的免疫试验表 E2蛋白的空间构象，但是消除了与CD81的结合活 明，重组包膜蛋白免疫能提高HCV感染者的细胞 性。该突变体刺激B淋巴细胞后，对B细胞的胞内 免疫应答，能在一定程度抑制HCV复制。 蛋白酪氨酸磷酸化水平变化影响不明显。进行小鼠