荷电超滤膜对蛋白质分离行为影响研究.pdfVIP

增刊 化 学 世 界 荷电超滤膜对蛋白质分离行为影响的研究 王来欢． 邵嘉慧。． 何义亮 (上海交通大学环境科学与工程学院，上海200240) 关键词：静电相互作用；超滤膜；荷电改性；蛋白质；透过率 膜分离技术目前已经在蛋白质分离和纯化中得 到了广泛的应用n]。随着超滤技术的发展，对超滤 膜进行荷电改性后用于蛋白质的分离和纯化也越来 越受到国内外很多学者关注，实验发现荷电蛋白质 和荷电膜之间的静电相互作用对产品截留和整个系 氦气瓶 and 统的分离行为都有很大影响，例如，Pujar Zydney【z]的实验表明当盐的浓150mM减小到 电子 1．5mM时，牛血清蛋白在切割相对分子质量为 天平 100000的膜上的透过率减小了近两个数量级。蛋白 图1超滤实验流程图 质截留率的剧增是由于在低离子强度下，带电的牛 过滤通量利用计时称量法得出，溶质透过率利 血清蛋白受到带电膜孔的静电排斥力大为增加。本 用公式(1)求出，其中溶液浓度采用紫外分光光度计 文通过再生纤维素膜(RC中性膜)和荷电改性再生在280nm处测定，其中原溶液样品浓度采用过滤 纤维素膜(RC负电膜和RC正电膜)对溶菌酶和牛 前后死端过滤器中溶质浓度即C。和C2的平均值， 血清蛋白(BSA)的分离实验，研究了膜的荷电改性、滤液浓度为对应不同压力条件下的C； 溶液。pH值和离子强度对分离性能的影响，为荷 s。=丽苦蜀 电超滤膜应用于蛋白质分离和纯化提供一定依据。 1实验部分 为了去除蛋白质在膜表面吸附对透过系数的影 I．I材料和仪器 响，实验所用膜均在较高浓度溶菌酶溶液中 实验所用溶菌酶(相对分子质量巩14．3千道 (pH=lO)进行过夜预吸附。 尔顿，等电点pl=11．O)和BSA(地67千道尔顿，再生纤维素膜和聚醚砜膜的亲疏水性通过接触 pI=4．9)购于国药集团化学试剂有限公司；所用超角的大小来判断，其值通过接触角测定仪自动测定。 30 滤膜为再生纤维素膜(切割相对分子质量Mwco 2结果与讨论 千道尔顿，直径d=25ram)，购于millipore公司；氯2．1膜荷电改性对溶茵酶透过率的影响 化钾及三羟甲基氨基甲烷等试剂以及0．22肛m孔 由图2可以看出，未改性的RC膜、改性后呈正 径混合纤维素微孔滤膜也均购于国药集团化学试剂 电和负电的RC膜上，溶菌酶的透过率有显著差异。 有限公司。 未改性的RC膜被认为基本不带电荷或带微弱的负 超滤实验采用Amicon公司的8010型死端过电荷，并且具为较好的亲水性(接触角为22。)。对 1 滤器：UV-2oo型紫外分光光度计，购于Unico公该膜进行溶菌酶预吸附后，纯水通量只有很小的改 司；SH23-2型磁力搅拌器，购于上海梅颖浦仪器有 变，说明膜对溶菌酶的吸附较小。图2还显示未改 限公司。 性的RC膜上溶菌酶的透过率最高，且随着离子强 1．2实验方法 度的增加，不存在明显的增长。 超滤实验在Amicon8010型死端过滤器中进当pH一7时，溶菌酶分子带正电荷，改性后呈 行，流程