五种中药(或方剂)含药血清对体外骨髓间充质干细胞增殖活性影响的筛选研究.pdfVIP

LISHIZHENMEDICINEAND MATERIAMEDICARESEARCH2011 VOL．22NO．6 时珍国医国药2011年第22卷第6期 五种中药(或方剂)含药血清对体外骨髓间充质 干细胞增殖活性影响的筛选研究 蔡建平1，张爱国2，许宝满1，谭湘陵3 (1．南京中医药大学，江苏南京210029； 2．南京中医药大学无锡附属医院，无锡市中医医院，江苏无锡214001； 3．南通大学生命科学学院，江苏南通216001) 摘要：目的筛选观察单味中药黄芪、丹参、仙灵脾、雪莲花及复方右归饮含药物血清对大鼠骨髓间充质干细胞体外培养 增殖活性的作用。方法雪莲花乙醇浸泡后定容，其他单味和复方中药水煎定容，高压灭菌。按10倍于任用剂量进行SD 大鼠灌胃，心脏采血，制备血清。取大鼠股骨和肱骨，分离骨髓间充质干细胞，常规培养传代3次后，加入含药物血清。 药物血清分为15％，10％，5％和1％浓度，作用3d后用MTF法测定细胞活力。结果雪莲花及右归饮含药血清在3个浓 度组促进细胞增殖(P0．05)。结论雪莲花含药血清具有促进大鼠骨髓间充质干细胞体外培养增殖活性的作用。 关键词：黄芪； 丹参；仙灵脾； 雪莲花； 右归饮；含药血清； 骨髓间充质干细胞； M订 DOI标识：doi：10．3969／j．issn．1008-0805．2011．06．046 中图分类号：R284．2文献标识码：B 文章编号：1008-0805(2011)06—1385-02 stem 间充质干细胞(mesenchymalcell，MSCs)是来源于中胚以上中药熬制后高压灭菌。药材均由无锡市中医医院中药 层的具有高度自我更新能力和多向分化潜能的成体干细胞，广泛 房提供，符合《中国药典》1995年版的有关规定。 存在于全身结缔组织和器官问质中，以骨髓组织中含量最为丰 2．2中药血清制备按照人与大鼠的剂量换算公式，确定每天的 富。MSC不仅能够向多种组织和细胞分化，而且易于分离、培剂量，以大鼠剂量的10倍进行灌胃，每天2次，两次间隔8h，连 养、扩增，易于外源基因的导入和表达，遗传背景相当稳定。因 续灌胃3d，第3天下午灌胃1h后戊巴比妥钠腹腔麻醉下体外 500 此，骨髓MSC已成为组织工程、细胞治疗、基因治疗等方面的研心尖采血，4。C过夜，2 r／min离心25rain，取血清，0．22 Ixm滤 究热点。 膜抽滤、分装，56℃、30min灭活，一20℃保存备用。 我国中药有两千多年的历史，资源丰富，中药中可能有大量 的能够促进干细胞增殖、分化的药物…。为了探讨补益类单味 死大鼠，医用酒精浸泡3～5min，无菌条件下取出双侧股骨、肱 mol／LPBS 中药黄芪、丹参、仙灵脾、雪莲花及复方右归饮对干细胞的影响， 骨、胫骨，剔除肌肉和脂肪组织，暴露骨骺端，经0．01 本研究组通过体外实验研究了5种中药(或方剂)的含药血清对冲洗干净后减去两端干骺端，暴露骨髓腔，吸取L—DMEM完全 骨髓问充质干细胞增殖的影响。现报道如下。 培养液冲洗骨髓腔，收集细胞，直至冲出的液体发白为止。加入 1材料 适量新鲜培养液，用吸管轻轻吹打制成细胞悬液，接种于25ml 清洁级成年SD大鼠(南通大学实验动物中心提供)，体质培养瓶内，置5％CO，、37。C饱和湿度培养箱内培养。24h后半量 量(230 换液，72h后全量换液，去除未贴壁细胞。此后每2～3d换液1 4-20)g，淋巴细胞分离液(上海试剂二厂)，L—DMEM (GIBCOBRL公司)，胰蛋白酶(SigmaUSA)，酶标