海湾扇贝Argopecten+irradians肽聚糖识别蛋白(PGRP)基因的cDNA克隆与其表达特征研究.pdfVIP

叠建ln’ 第三届海洋生鞠膏技术论坛 2005．08．19-23 海湾扇贝Argopecten 基因的cDNA克隆及其表达特征研究+ 倪多娇¨扪，宋林生¨木’，吴龙涛¨，常亚青∞苏建国” 中国科学院海洋研究所实验海洋生物学开放实验室，青岛266071 2中国科学院研究生院， 北京100039 3大连水产学院， 大连116023 摘要：天然免疫系统通过一系列高度保守的模式识别受体识别病原体相关分子模式。肽聚糖识 recognitionpl‘oteins，PGRP)作为一种模式识别蛋白，可识别肽聚糖和含 别蛋白(peptidoglycan 肽聚糖的细菌，从昆虫到人类均高度保守，在天然免疫和获得性免疫应答中发挥重要的识别和 分析的结果显示它和昆虫PGRP基因相似性较高。海湾扇贝PGRP基因由1018个核苷酸组 成，开放阅读框为605个核苷酸，编码一条205个氨基酸的多肽。同时本研究使用实时定量 湾扇贝PGRP基因在被检测的组织中都有表达，其中，在血淋巴，性腺和肾中中的表达量相 对较高，而在其他组织中的表达量则相对较低。 海湾扇贝PGRP基因是第一个软体动物中 发现的PGRP基因。 关键词：海湾扇贝，非特异性免疫，EST，cDNA文库，肽聚糖识别蛋白，mRNA表达 引言 无脊椎动物缺乏豸犬得性免疫系统，1仁特异性免疫系统在无脊椎动物免疫中发挥了重要 作用。微生物细胞擘的组成成分是天然免疫的高效活化分子。这些分子jt[1G一细菌的脂多糖 molecular patterns，PAMPs)。天然免疫通过在进化中高度保守的一系列模式识别受体 (pattemrecognitionreceptol。S，PRR)识别微生物的保守分子模式，在抵抗入侵病原体的第一线 防御中发挥关键作用…。 作为重要的PAMP，月太聚糖是几乎所有细菌胞壁的本质成分【2】，尤其富含J=：G+细菌。肽 聚糖作用‘J：脊椎动物和1卜脊椎动物免疫系统体液成分(补体、溶菌酶、可溶性CDl4等)和细 胞成分【3】，诱导昆虫强力抗菌反J澎‘31，jf二活化哺乳动物单核P巨噬细胞和B淋巴细胞‘舶】。肽聚 科学基金资助项目。 +通讯作者。Email：幽5Q墼垡啦§：删如塑：蛆 i毽ln。 第三届海洋生物育技术论坛 200s。08．19．23 糖是真核生物免疫系统识别的理想靶标。 mori)的血淋 PGRPs这一名冽首次由Ashida研究小组提出【7】。他们从家蚕(Bombyx 巴中纯化到一种19kDa的蛋白，该蛋白具有结合细菌和肽聚糖的能力，并且因此而激活酚氧 化酶原级联反应，从而产生黑色素【8】，该级联反应是昆虫抗菌防御的一部分，它在表皮、血 淋巴及组织中产生黑色素，黑色素包裹微生物从而限制感染【9-101。昆虫PGRP-S的克隆促使 老鼠和人的PGRP类似物的克隆【I01，分析表明PGRPs从昆虫到人类高度保守。同时，从老 I’内同源序列…】。果蝇、非洲疟蚊及人类基因组的测序使人 鼠的腺癌中克隆了被命名为Ta97 们发现在昆虫及哺乳动物中PGRPs的多样性[t21o根据蛋白的结构，昆虫PGRPs被分为两种型： 短型和长型。短型(PGRP—S)是一类小分子的胞外蛋白；长型(PGRP—L)是一类跨膜蛋白 N一乙酰胞壁酸与肽之间的键。PGRP结构域可分为3个亚结构域(PGI强一I，PGRP—II及 8 PGRP．II及PGRP-III高度保守(Identities74％左右，Similaritiesl％左右)；在哺乳动物与 昆虫之间也是很保守的(Identities44％左右，Similarities54％左右)。 在昆虫，一些PGRP是分泌型的，一些是胞质蛋白，还有一些是跨膜蛋白。某些昆虫PGRP是 组成性表达丽另外一些则可诱导性表达。果蝇PGRP．S分泌jF身体不I司部位，但多表达J：免疫 器官和细胞如脂肪体、内脏和血．绌