山药染色体制片技术的优化.pdfVIP

中国园艺文摘  2014年第8期 山药染色体制片技术的优化 1 1 1 2 1 1 周翼虎 ，霍秀文 ，刘向宇 ，邰丽华 ，苗慧琴 ，张灵超 （1.内蒙古农业大学 农学院/内蒙古野生蔬菜种质资源与创新重点实验室，内蒙古 呼和浩特 010019； 2.内蒙古师范大学 生命科学与技术学院，内蒙古 呼和浩特 010022） 山药( Thunb.)为药食兼用的常见蔬菜，而其染色体的研究相对滞后。以根尖为试验材料， 摘  要： Dioscorea opposite 分别考察不同的取材方式、预处理试剂、预处理方法以及解离方式对山药染色体制片效果的影响，筛选优化制片 的关键技术，以期为今后细胞学研究打下基础。结果表明：室内基质培养块茎 ( 或零余子 ) 的方式获取的根尖中中 期分裂相个数最多，且染色体分散良好的中期分裂相占的比例最高；适合于山药核型分析的预处理试剂为8-羟基 喹啉同秋水仙素的混合液、8- 羟基喹啉溶液，其中 8- 羟基喹啉溶液预处理后染色体缢痕更清晰，为最好的预处 理试剂；预处理方法以低温4℃下2 mmol/L的8-羟基喹啉预处理2 h最好；采用酸解加酶解的方式解离效果明显 好于单用酸解的方式，并且得到的制片中染色体形态清晰，96.3%的中期细胞的染色体分布于同一个水平面上。 关键词：山药；染色体制片；酶解去壁 山药(Dioscorea opposite Thunb.)，又称长山药、怀山 年引自河南温县，种植于内蒙古农业大学山药种质资源圃。 药、面山药[1]，为薯蓣科薯蓣属缠绕草质藤本植物，其地 1.2  试验方法 下块茎既是一种传统的、营养丰富的蔬菜，又被历代医学 1.2.1  取材方式… 以根尖为试验材料，待根长1～2…cm 家列为滋补的上等药材。山药有原产我国的说法，在国际 时，8 00～10 00取幼嫩根尖。获取根尖的方式有3种：… ∶ ∶ [2] 上俗称“Chinese…yam” 。山药在我国种质资源丰富，从 (1)通过大田植株取根：于7～8月份生长旺盛时期，浇水 [1] 东北到广西均有分布，北方温带地区普遍栽培 ，是我国 后第2天取幼嫩白色根尖。(2)通过组培苗取根：组培苗的 [3] 重要出口特有蔬菜之一 。中医药典记载山药具有补脾、 获得方式为7～8月取植株幼嫩带节茎段，作为外植体接 [4] 养胃、益肺、固肾、益精的作用 ，现代研究表明，山药 种于初代培养基，长成完整植株后，继代培养取带节叶片 [5] 富含多种微量元素、维生素，含有全部的人体必需氨基酸 ， 转接。初代培养基[10] 为MS+琼脂0.7%+蔗糖3%+NAA… 含有山药多糖(包括黏液质及糖蛋白)、薯蓣皂苷、尿囊 2…mg/L+KT…0.5…mg/L；继代培养基，即生根培养