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止嗽丸甘草苷的含量测定分析 　　【摘要】目的：建立止嗽丸中甘草苷的含量测定方法。方法：采用HPLC法，色谱柱：HypersilC18柱(5μm;4.0mm×250mm):流动相:乙腈0.5％冰醋酸（体积比20∶80）；流速:1.1mL/min；检测波长:276nm；柱温:30℃；进样量:10μL。结果：甘草苷在0.020～2.001μg范围内与峰面积呈良好的线形关系：r=1.000，平均回收率98.7%，RSD为0.38%。结论：所建立的方法简便可行、重现性好、可作为止嗽丸质量控制的方法。 　　【关键词】止嗽丸；HPLC；甘草苷；质量标准 　　止嗽丸收载于卫生部药品标准中药成方制剂第一册(1989)，由紫菀（制）、白前、甘草等七味中药组成，具有止咳去痰、疏风理肺之功效，用于风邪犯肺、咳嗽咽痒、痰不易咯出者。原质量标准中，只有性状和检查项，无其他检验项目。本文采用HPLC法对处方中甘草所含甘草苷进行含量测定，以便对该制剂进行质量控制。 　　1仪器与试药 　　LC20A高效液相色谱仪，可变紫外检测器(日本岛津)。 　　甘草苷对照品（由中国药品生物制品检定所提供，批号：111610200503）；止嗽丸为实验室样品；甲醇为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。 　　2方法与结果 　　2.1供试品溶液的制备:色谱柱:HypersilC18柱(5μm;4.0mm×250mm):流动相:乙腈0.5％冰醋酸（体积比20∶80）；流速1.1mL/min；检测波长276nm；柱温30℃；进样量:10μL。 　　2.2对照品溶液的制备:取甘草苷对照品适量，加体积分数70％乙醇制成每1mL含20μg的溶液，即得。 　　2.3供试品溶液的制备:取本品粉末约1g，置具塞锥形瓶中，精密加入体积分数70％乙醇100mL，称定重量，超声处理30min，取出，再称定重量，用体积分数70％乙醇补足减失的重量，滤过，即得。 　　2.4方法的专属性考察:在上述的色谱条件下，将甘草苷对照品溶液、供试品溶液、甘草阴性对照溶液注入液相色谱仪中，得HPLC图，结果显示阴性对照无干扰。 　　A.甘草苷对照品;B.止嗽丸样品;C.甘草阴性对照 　　2.5线性关系的考察:精密称取甘草苷对照品适量，加流动相制成每1mL分别含甘草苷2.001、4.002、10.00、2001、40.02、200.1μg的溶液，分别吸取10μL进样测定峰面积。以峰面积为纵坐标，对照品的质量浓度为横坐标，绘制标准曲线，计算得回归方程:y=29543x+144.52，r=1.000。表明甘草苷进样量在0.020～2.001μg范围内与峰面积呈良好的线形关系。 　　2.6精密度试验:分别取对照品溶液10μL，连续进样5次，测定峰面积，计算得甘草苷的峰面积RSD分别为0.4%。 　　2.7重复性试验：精密称取同一批号样品，按供试品溶液制备方法平行制备5份，依法测定，计算甘草苷含量RSD值为0.6%。 　　2.8稳定性试验：取同一供试品溶液，于0、2、3、4、6、8、11、24h进样测定，计算得甘草苷的峰面积的RSD为1.0%,表明样品溶液在24h内稳定。 　　2.9加、样回收率试验：分别精密称取已知含量（含量为1.312mg/g）的本品适量6份，分别精密加入甘草苷对照品溶液（0.2001mg/mL）各3mL，按“供试品溶液的制备”项下方法制得供试品溶液。分别吸取上述供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定其中甘草苷的总量，与止嗽丸中应含有的甘草苷总量进行比较，计算回收率。 　　2.10样品测定：分别精密称取不同批号的止嗽丸适量，按“供试品溶液的制备”项下方法制备溶液，按“供试品溶液的制备”项下色谱条件进行HPLC分析，结果3个批号的样品所测得的平均含量为1.312、1.323、1.298mg/g。 　　3讨论 　　甘草中的黄酮类成分具有抗氧化、抗病毒、抗炎、抗溃疡作用。甘草苷是甘草的黄酮类成分之一，也是止嗽丸治疗疾病的活性成分，故选择甘草苷作为该制剂的定量指标。 　　通过选用乙腈0.5％醋酸(体积比1∶4)为流动相，能很好地将甘草样品中的甘草苷分离出来。 　　甘草苷可溶于乙醇、甲醇和水等溶剂，但因溶剂极性的不同，其溶解度也不同，参考《中国药典》2005年版一部甘草项下甘草苷的提取方法，选用体积分数70％乙醇作为提取溶剂，提取效率高。另外，对照品及阴性对照的制备同样采用体积分数70％乙醇为溶剂，确保与供试品平行一致，且该溶剂低毒环保。 　　本法简便、快速、专属性强、重现性好，可作为止咳丸的质量控制方法。 　　参考文献 　　[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典：2005年版一部［M］.北京：化学工业出版社，2005：60 　　[2]贾国惠，贾世山．甘草中黄酮的药理作用研究进展［J］．中