土壤中耐砷细菌的筛选和砷还原基因多样性分析_陈倩.pdfVIP

生态环境学报 2011, 20(12): 1919-1926 Ecology and Environmental Sciences E-mail: editor@ 土壤中耐砷细菌的筛选和砷还原基因多样性分析 * 陈倩，苏建强 ，叶军 中国科学院城市环境研究所，中国科学院城市环境与健康重点实验室，福建 厦门 361021 摘要：采用琼脂平板培养法从湖南富砷土壤中筛选出43 株耐砷细菌。16S rRNA 序列分析结果表明所筛选菌分属于四个门： Actinobacteria 、Proteobacteria 、Firmicutes 、Bacteroidetes ，其中71.1%为革兰氏阳性菌。通过PCR 和克隆测序等方法检测耐 砷菌的砷还原相关基因（arrA、arsC 、arsB/ACR3 ）及其基因多样性。检测结果显示：43 株菌中，6.9%含异化砷还原基因arrA ， 30.2%含细胞质砷还原基因 arsC ，27.9%含 As （III ）运载蛋白基因arsB/ACR3 ，这些基因在细菌中的出现频率较低。通过 Mega 软件构建系统发育树发现 arrA 基因的多样性可能受一定的地域差异影响，arsC 基因在一些菌株中存在着基因水平转 移现象，同时表明α变形菌可能更倾向于拥有Acr3 型As(III)载体蛋白，而arsB 则多出现在芽孢杆菌中。 关键词：耐砷菌；异化砷还原基因arrA ；细胞质砷还原基因arsC ；As （III ）运载蛋白基因arsB/ACR3 ；基因多样性 中图分类号：X172 文献标志码：A 文章编号：1674-5906 （2011 ）12-1919-08 类金属砷广泛存在于自然界中，毒性极强且能 道很少，基于此，本文以湖南富砷土壤为样品，分 致癌，在环境中的价态有 As （0 ）、As （-III ）、As 离筛选了耐砷细菌，探究其种群结构分布趋势，检 （III ）、As （V ）。在长期的历史演化过程中微生物进 测砷还原相关基因（arrA、arsC、arsB/ACR3 ）以研 化出各种抗砷机制。其中砷还原微生物，能将易吸 究筛选菌潜在的还原和转运砷的能力，以期为砷污 附于钙、铁、铝等矿物质上的As （V ）还原为移动 染土壤的微生物修复提供一些理论基础信息，并通 性和毒性较强的As （III ），这种特性一方面会向地 过基因的分布规律和 DNA 序列对其进化进行一定 下水中引入As （III ），对公众环境健康造成潜在威 的探讨，同时也丰富了基因库中来自我国土壤的纯 胁[1] ，另一方面又可促进砷污染土壤中砷的去除 培养细菌关于这些功能基因的多样性信息。 [2,3] ，因此在砷污染研究中引起了特别的关注。 1 材料与方法 目前研究发现的砷还原微生物分为两类，一类 1.1 材料 是厌氧条件下能以乙酸盐、乳酸盐等为电子供体， 供试土壤采自湖南石门和郴州两地，采回的新 以As （V ）为电子受体，在还原As （V ）的过程中 鲜土壤充分混匀后取一部分立即进行细菌分离，剩 获得能量供自身生长的异化砷还原微生物[4] 。研究 余的土样经冷冻干燥用于砷含量测定。土壤采样点 表明异化砷还原作用由异质二聚体蛋白 ArrAB 来 具体情况列于表 1。用于功能基因检测的对照菌株 完成[5] 。另一类砷还原微生物通过细胞内砷还原酶 E. coli WC3110 （△arsC ）、E. coli AW3110 [8] ArsC 将As （V ）还原为As （III ），再由As （III ） （△arsRBC ）由美国Barry Rosen 教授赠送 。 运载蛋白ArsB/Ac