聚合酶链反应_PCR_技术与基因扩增分析仪器_PCR仪_张文超.pdfVIP

研究论文 生命科学仪器 2005第3卷/第3期 聚合酶链反应 （PCR）技术与基因扩增分析仪器 （PCR仪） 张文超 （辽宁石油化工大学信息工程学院，辽宁抚顺 113001） 摘要 较为全面地论述了聚合酶链反应 （PCR）技术与基因扩增分析仪器 （PCR仪）。较为详细地阐述了PCR基本原 理、PCR结果的检测与分析、实时定量PCR技术、影响PCR效果的因素、PCR技术的应用、PCR仪器的现状及其发展 方向。 关键词 PCR聚合酶链反应，基因扩增分析，实时定量，生命科学仪器 生命科学仪器的发展为生命科学提供了有效工具 得诺贝尔化学奖。 和强有力的研究手段。使其从细胞水平上的研究飞跃 1.1PCR技术原理和方法 发展到分子层次上的深入研究。离开这些现代化生命 众所周知，DNA是由四种碱基按互补配对原则 科学仪器的支撑，许多重大的研究项目和工程都将举 （即腺嘌呤A对胸腺嘧啶T，鸟嘌呤G对胞嘧啶C）组 步维艰。 成的螺旋双链。在生物体的细胞内，DNA复制时，解 PCR仪器是一种应用广泛、十分重要的生命科学 螺旋酶首先解开双链让它变成单链作为DNA模板（复 仪器。广泛应用在生命科学研究、生化分析、临床诊 制或扩增的起点），然后，另一种酶——RNA聚合酶 断、药物分析、法医鉴定和疫情快速检验等各个领域 合成一小段引物（primer）结合到DNA模板上，最后， 中作为基因扩增分析的首选仪器设备。 DNA聚合酶以这段引物为起点，合成与DNA模板配对 PCR仪器依据的是一种称为聚合酶链反应 的新链。PCR即是在体外模拟体内DNA复制的过程， （Polymerase Chain Reaction，简称PCR）的生化技术。 它用加热的办法让所研究的DNA片段变性解链成为两 本文尝试着从PCR技术到PCR仪器，从PCR基 条单链，人工合成两个引物让它们结合到DNA模板 本原理到PCR结果的检测与分析，从非实时PCR技术 （这两个单链）的两端，DNA聚合酶即可以大量复制该 （终点法）到实时定量PCR技术，从影响PCR效果的 模板。 因素到PCR技术的应用，从PCR仪器的现状到其发展 假定我们要研究的DNA双链两端的序列是（如图 方向等几个方面对PCR技术和PCR仪器较为全面的论 1-a）： 述。期望能够给读者以启发和某些帮助。 1 聚合酶链反应 （PCR）技术 聚合酶链反应 （Polymerase Chain Reaction)简称 图1-a PCR，是一项在短时间内体外大量扩增特定的DNA片 段的分子生物学技术。 在PCR之前，首先人工合成两段有20－30个碱 这项技术的发明人是Kary Mullis。他从1983年开 基的引物，能够分别与上下两条链的一端配对，比如 始研究PCR技术，1985年开始被逐渐采用。其后，PCR 一条是 （为与模板区别，以小写字母表示） 迅速成为分子生物学的一项常规手段，并得到了广泛 ataagcccgaaaggttcgtt，另一条就是 。把 的实际应用，被许多科学家视为近十年来分子生物学 这两段引物和DNA模板、DNA聚合酶、底物dNTP（四 领域最重要的一项技术突破。1993年，Mullis因此获 种脱氧核苷）混合在一起，我们就可以开始做PCR了。 *作者简介：张文超，男，1955年生，博士，副教授。从事智能仪器相关领域的教学、科研和产品开发设计工作。 邮编：113001。地址：辽宁省抚顺市望花区丹