罗非鱼胰蛋白酶ⅡcDNA克隆与序列分析.pdfVIP

南京农业大学学报 　2005, 28 ( 1) : 139～142 　 J ou rna l of N anj ing A g ricu ltu ra l Un ivers ity 罗非鱼胰蛋白酶 ⅡcDNA 克隆与序列分析 1 2 2 黎军胜 , 李建林 , 吴婷婷 ( 1. 南京农业大学食品科技学院 , 江苏 南京 2 10095; 2. 中国水产科学研究院淡水渔业研究中心 , 江苏 无锡 2 14081) 摘要 : 应用 3 ′RACE方法对尼罗罗非鱼 (O reoch rom is n iloticus) 和奥利亚罗非鱼 (O reoch rom is au reus) 胰蛋白酶 ⅡcDNA 进行了克隆并进行序列测定和分析 。结果表明 , 胰蛋白酶 Ⅱ序列中均具有催化活性必需的高度保守的催化三联体氨基酸 残基 (H is、A sp、Ser) 和构成二硫键的 10个半胱氨酸残基 , 以及决定底物特异性的保守性氨基酸残基 ———天冬氨酸残 基和 S1结合袋 。奥利亚罗非鱼和尼罗罗非鱼胰蛋白酶 ⅡmRNA 序列以及氨基酸序列同源性分别为 964 %和 975% 。 关键词 : 罗非鱼 ; 胰蛋白酶 Ⅱ; cDNA ; 克隆 中图分类号 : S9631　　　文献标识码 : A 　　　文章编号 : 1000 2030 (2005) 01 0 139 04 C lon ing and se quenc ing o f tryp sin ⅡcDNA s in tilap ia 1 2 2 L I Junsheng , L I J ianlin , WU Tingting ( 1. Co llege of Food Science and Technology, N anj ing A gricu ltu ral Un iversity, N anj ing 2 10095, Ch ina; 2. Fre shwater F isheries R esearch Center, Ch ine se A cadem y of F ishery Science s, W uxi 2 14081, Ch ina) Ab s tra c t: Tryp sin ⅡcDNA s in two sp ecies of tilap ia (O reoch rom is au reus and O reoch rom is n iloticus) were cloned and sequenced by m ean s of 3 ′RACE. The re su lts indicated that tryp sin Ⅱof O reoch rom is n iloticus and O reoch rom is au reus had h igh ly con served a m ino acid residue s e ssential for the catalytic activity and conform ational m ain tenance, being H is, A sp , Ser of catalytic triad and ten cysteines form ing disu lfide b ridges, together w ith the residue s determ in ing sub strate sp ecificity and generating the S1 sub strate b inding pocket of a typ ical tryp sin natu re. Tryp sin Ⅱand its mRNA of O r