RNA操作指南.docVIP

RNA实验方法附录 一、RNA抽提注意事项 * 尽可能无RNA酶的环境下操作，最好有专门场所* 耗材的处理：电泳槽需0.5 M NaOH处理过夜后DEPC水清洗试管氯仿浸泡处理后DEPC水清洗枪头和eppendorf管DEPC水浸泡后灭菌处理* 实验者本身防护：一次性手套，口罩等* 启盖前震荡离心管有助于防止气溶胶形成* 正确的操作方式 二、RNA操作常见问题分析 可能原因 解决方法 产量太低 样本裂解或匀浆不充分 延长匀浆时间 RNA沉淀溶解不充分 65℃加热可促进溶解 A260/A2801.65 匀浆时，样本太多，而抽提液使用量太小 增加RNA抽提试剂用量 匀浆后，样本没有静置 室温静置5分钟，促进裂解反应 水相中可能有酚残留 吸取上清时应注意操作的正确性 RNA沉淀溶解不充分 加热可促进溶解 测比值时，RNA溶解在DEPC水中，低的离子浓度和PH值增加了280nm的吸光值 比值时，采用TE溶液溶解RNA RNA降解 取样操作不正确 取样后应立即抽提和冻存 样本保存不当 －80℃或液氮保存 液相中可能有RNA酶污染 采用RNA抑制剂 制胶时所用甲醛的PH值小于3.5 试剂新鲜配制 DNA污染 匀浆时，样本太多，而抽提液使用量太小 增加抽提液用量 蛋白、多糖污染 抽提时蛋白和多糖去除不彻底 RNA沉淀时，加入部分盐溶液，选