秦川牛生长激素受体基因第10外显子SSCP研究.pdfVIP

第十次全国畜禽遗传标记研讨会论文集 秦JJl牛生长激素受体基因第10外显子的SSCP研究’ 赵高锋1，陈宏1，一，陈琳1，雷初朝1，房兴堂2 (1．西北农林科技大学动物科技学院，陕西省农业分子生物学重点实验室，杨凌7121002；2．徐州师范大 学细胞与分子生物学研究所，江苏徐州221116) 摘要：利用PCR-SSCP技术研究了136头秦川牛GHR基因笫10外显子多态性。结果表 明，所研究的秦川牛群体GHR基因该座位存在PCR-SSCP多冬陛，发现了A、B、c三个等位 态。对该座位的多态性进行分析，认为该座位有较好多态性，提示在秦川牛群体的培育改良中 可加强该座位^．工选择的强度。 关键词：秦川牛；PCR-SSCP；生长激素受体基因；多态性 生长激素(G}I)是调节动物生长、发育等代谢过程的重要内分泌因子。GH在组织和细胞水平发挥作 用的第～步是和靶细胞膜表面的生长激素受体(GHR)结合，由GHR介导将信号传入细胞内从而产生一系 列的生理效应。组织中GHR量的多少、功能的正常与否将影响GH生理效应的发挥，如性连锁矮小鸡 el 的生长迟缓症状就是因为GHR基因异常导致动物组织中GHR数量显著减少甚至缺乏所致cI抽akaal， 1995)“l。有关GHR的研究近十多年来一直是—个十分活跃的研究领域，并己取得了显著的进展。 bGt-IR基因被定位在20号染色，由10个外显子，9个内含子组成。如果GHR基因碱基序列发生突变就 可能影响到GHiE常功能的发挥，从而影响到产奶、产肉等许多性状。因此，将bGHR作为后选基因来研 基因多态性与生产性状的关系作了研究，发现了一些对影响生产性状有用的多态位点。 秦川牛是中国五大地方黄牛良种之一，因其资源宝贵，现已被列为国家级资源保护品种。由于社会 经济的不断发展和人民生活水平的不断提高及市场的变化，秦川牛向肉用型选育已成为历史的必然。笔 者以G】弧L基因为候选基因，利用PcR．ssCP技术研究了秦川牛群体内G}Ⅱt基因第10外显子的遗传变异， 试图找到一些多态位点，为秦川肉牛的分子育种提供依据。 1材料与方法 1．1实验材料 136头纯种秦川牛血样采自陕西省大荔县、陕西省秦川牛原种场、扶风秦川牛场和陕西省渭南市临渭 区秦川牛产区。所采个体无亲缘关系。 1i2引物设计及PCR—SSCP分析 上海生物工程技术服务有限公司合成。 25 mmol／L uLPCR反应体系包括1UTaqDNA聚合酶，2．5 MgCh2．0肛．，10XBuffer2．5皿。，2．5 教育创新基金(No．05YCH018)资助。 作者简介·赵高峰(1982一)，男，汉，陕西省扶风人，硕士研究生，专业方向：动物遗传学。 net 通讯作者：陈宏(1955--)，男，博士，教授，博士生导师，研究方向；生物技术与动物遗传育种。E-maihchenhon91212@263 No．1 Animal Bulletin (October2006)Vo!．10 Biotechnology 431 40 40 94℃30s，57Cs，72(2 s，共32个循环，最后72c延伸10 min。4皿的PCR产物加入6旺变fLJ=样 缓冲液，98(2变性10rain后，立即冰浴15rain，8％聚丙烯酰胺凝胶电泳后、染色、判型和分析。 2结果与分析 2．1PCR扩增 用所合成的引物扩增基因组所得产物用1．5％的琼脂糖凝胶电泳检测，扩增片段与目的片段大小一 致，且目的条带清晰特异性好，可直接用于sscP9析。(图1) 图1秦川牛GHR基因第10外显子PcR产物电泳 F．g．1