牛口蹄疫病毒非结构蛋白抗体胶体金免疫层析试纸条研究.pdfVIP

牛口蹄疫病毒非结构蛋白抗体胶体金 免疫层析试纸条的研究 马永缨杨璐赵铁柱孙 明 北京世纪元亨动物防疫技术有限公司，北京，100085 摘要 目的研制牛口蹄疫病毒(foot—and—mouthdiseasevirus，FMDV)非结构蛋白抗体 胶体金免疫层析试纸条，用于FMDV感染动物检测、诊断。方法利用基因工程表达FMDV 非结构蛋白VPgl一2，标记胶体金颗粒。采用双抗原夹心法原理建立胶体金免疫层析试纸条检 测方法。通过方阵试验确定VPgl一2抗原和Au—VPgl一2抗原以及单克隆抗体的最适T作浓 度，组装试纸条，对人工感染FMDV牛体内FMDV非结构蛋白抗体消长情况进行测定，对94 份背景清楚牛血清样品和189份临床样品进行检测，并与FMDV非结构蛋白抗体单抗阻断 单克隆抗体浓度为1．Omg／ml进行试纸条组装。人T感染5头牛全部出现FMDV非结构蛋 白抗体阳性反应。最早检出时间为感染后20天，感染后30～60天抗体达到最高峰，抗体阳性 反应持续最长时间为感染后540天以上。对背景清楚血清样品检测的敏感性为98％，特异性 为100％，与FMDV非结构蛋白抗体单抗阻断ELISA方法检测结果的符合率为98．9％。对 189份临床样品检测的特异性为100％，敏感性为97．1％，与FMDV非结构蛋白抗体单抗阻 断ELISA方法检测结果的符合率为99．5％。 关键词 口蹄疫；非结构蛋白抗体；胶体金免疫层析法 口蹄疫(foot—and—mouthdisease，FMD)是由口想的效果。 蹄疫病毒引起的偶蹄动物急性、热性、高度接触传染 主要材料及仪器 性、烈性动物疫病。其临床表现以口腔粘膜、舌面， 鼻镜、蹄部、乳房、皮肤发生水泡和溃疡为特征。世 1．生物材料 界动物卫生组织(0IE)将该病列在15个A类动物1．1抗原与单克隆抗体大肠杆菌表达的口蹄 疫病名单之首，中国政府也将口蹄疫排在14个一类 疫病毒非结构蛋白VPgl一2抗原由中国动物疫病预 动物传染病的第一位。由于该病的发生会造成巨大 防控制中心提供[21，VPgl一2抗原浓度为3．5 的经济损失和政治影响。因此，口蹄疫防治工作始 mg／ml。VPgl一2抗原的单克隆抗体本公司制备保 终得到世界各国政府的高度重视。 存，浓度为9．2mg／ml。 动物感染口蹄疫后，口蹄疫病毒在动物体内持 1．2血清样本 口蹄疫阴性牛血清28份，人工 续存活数月乃至多年，甚至终生，而动物并不表现临 感染牛血清20份、免疫后感染牛血清14份、反复免 床症状，但是它们能向外界排口蹄疫病毒，成为重要 疫牛血清6份以及人工感染后不同时间采集牛血清 的传染源。感染口蹄疫病毒的牛，个体带毒最少为 90份。均由内蒙自治区动物疫病预防控制中心提 5年，群体带毒时间至少24年Ⅲ。持续带毒感染动 供。口蹄疫病毒非结构蛋白抗体单抗阻断El。ISA 物与健康动物混群时，特别是在长途运输或动物抵 试剂盒生产质量控制牛血清11份，口蹄疫感染牛血 抗力下降时，极易发生口蹄疫疫情。因此，检测口蹄 清45份、口蹄疫灭活疫苗免疫群体的牛血清共10 疫病毒感染动物是防制口蹄疫疫情发生的重要措施 份、口蹄疫阴性群体牛血清28份，189份临床牛血 之一。 清样品，本公司制备保存。 本研究采用表达的FMDV非结构蛋白VPgl一21．3生物试剂 口蹄疫病毒非结构蛋白抗体单 为抗原，进行胶体金标记，采用双抗原夹心法研制出 检测牛口蹄疫病毒非结构蛋白抗体胶体金免疫层析 本公司生产。 试纸条，用于口蹄疫感染牛的检疫和诊断取得了理 2．试剂 · 298·