五株H5N1亚型禽流感病毒对小鼠致病性研究.pdfVIP

—— △亘茎坐堕銎些堕堕鲨塑堑些墨堑塑 五株H5N1亚型禽流感病毒对小鼠致病性的研究 朱启运。2，魏建忠2，李雁冰1，姜永萍1，邓国华’，田国斌’，陈化兰’‘ (1中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室，哈尔滨，150001 2安徽农业大学畜牧水产学院，合肥，230036) 禽流感(Avian 重全身败血症等多种症状的烈性传染病，根据临床症状可以分为无致病性、低致病性和高致病性三种禽流 类生命健康也具有巨大的潜在威胁，这也是世界上首次发现该亚型禽流感病毒可以突破种问障碍，直接传 染给人并引起发病。自此，禽流感对人类健康的影响，引起世界诸多国家的关注。我国自1996年第一次 从广东鹅体内分离到H5NI亚型高致病性禽流感病毒以来，已经陆续从多种野生和家养的禽类(包括水禽) 体内分离到了H5N1亚型禽流感病毒，给我国的养殖业带来了巨大的经济损失，而且已有的大量证据证明 该豫型禽流感病毒可以由禽类传播给哺乳动物，因此，国内外已经有学者进行了禽流感或流感病毒人工感 染小鼠、猪、猴和马等哺乳动物的试验。 本研究从安徽省的不同地方分离了五株不同宿主来源的禽流感病毒，在农业部动物流感重点开放实验 室进行血清学鉴定为H5NI亚型。为了全面了解五株安徽分离株对哺乳动物的潜在危害，我们进行五株禽 机制和分子生物学特性，以及为新型疫苗的研究提供实验数据。 1 材料与方法 I．I病毒 五株不同禽源的病毒由安徽农业大学动物传染病研究室收集，在中国农科院哈尔滨兽医研究所农业部 动物流感重点开放实验室鉴定并保存。分别命名为： 、 (PS／AH／89／02) A／pheasant／Anhui／89／2002 、 A／chicken／Anhui／90／2002(CK／AH／90／02) A／quail／Anhui／151／2003(QA／AH／15I／03)。 1．2SPF BALB／c小鼠 购自北京医学科学院实验动物中心。 1．3病毒对小鼠的致病性试验 BALB／c 小鼠，每只小鼠接种50ill，每个毒株接种8只小鼠，并在感染后第三天扑杀3只，采集脑、心、肝、脾、 肺、肾六个脏器，同时每日称量小鼠体重、观察小鼠精神状态，并记录小鼠发病情况和死亡情况。 1．4病毒对小鼠LD”的测定 个毒株接种6个稀释度。每个稀释度鼻腔接种5只小鼠，接种后每目称量小鼠体重、观察小鼠精神状态， 并记录小鼠发病情况和死亡情况，计算小鼠的LDm 人畜共忠传染撕防治{i：}f究新成果汇编 1．5病毒的组织嗜性测定 取保存的小鼠脑，心、肝、脾、肺、肾六个脏器，匀浆，倒碎溶于】ml无菌的PBS缓冲液中，4000rpm 离心5min后，取上清10倍比稀释，每个稀释度接种3枚不含有禽流感病毒抗体的11日龄非免疫鸡胚， 测定血凝价，依据血凝价的有无判定该组织是否含有禽流感病毒以及组织的病毒含量，然后按照 Reed—Mneneh方法计算病料组织中的EIDm以此来作为衡量病毒对小鼠组织嗜性的标准。 2 结果与分析 2．1病毒对小鼠的致病性试验 106EID。的病毒剂量鼻腔感染小鼠，在14天豹观察期内。五株病毒均能够引起小鼠体重下降；五株病 毒均能够引起小鼠的死亡，其中有两株病毒能够引起小鼠全部死亡，这两株病毒为cK／AH／90／02和 CK／AH／149／03。结果详见(图2-1和2—2略)。 2．2病毒对小鼠LDm的测定结果 78和10。“。同 具体结果见(图2—3和2-4略)。 2．3病毒的组织嗜性测定结果 病毒感染后3天剖杀小鼠，取脑、心、肝、脾、肺和肾6个脏器进行病毒含量滴定，结果表明所有分 离株均能够感染小鼠，可以在肺脏中增殖，但是肺脏中病毒的含量不同，没有从脑和肝脏中分离到病毒。 结果详见表2—5。