南昌大学医学院病理学实验课课件.pptVIP

第一次实验 刘昕 微生物学实验目的、要求、实验室规则 实验内容 1.介绍微生物学实验目的、要求、实验室规则 教师讲解 2.显微镜使用（油镜） 教师讲解 3.细菌的基本形态观察 教师讲解 球菌 （葡萄球菌, 链球菌） 杆菌（大肠杆菌） 弧菌（霍乱弧菌） 4.细菌染色法:革兰氏染色 （葡萄球菌、大肠杆菌） 个人操作 5.正常人体皮肤上的细菌分布 个人操作 6.空气中细菌的检测 操作示教 *注：红色部分为作业。作业要求：要写明实验原理与步骤。 * Experimental Objective 实验目的 通过实验以验证课堂所讲的理论，以使学生加深和巩固对课堂所讲的内容的理解和体会 通过实验使同学掌握医学微生物学的基本技能，树立无菌观念，为临床及基础医学有关科学打好基础 培养学生独立工作能力和科学思维的工作方法 Experimental Requirement 实验要求 每次实验前务必作好预习，明确实验的目的、内容、操作中注意事项及其理论依据等，避免或减少错误的发生。 在实验过程中，要坚持严肃性、严格性和严密性。 实验结果必须真实地记录下来，然后进行分析，得出结论。 Lab Rules 实验室规则 除必要的文具、实验指导、笔记本等外，与实验无关的物品不要带入实验室。 进实验室必须穿上实验衣，实验室内禁止饮食。 若发生病原微生物污染实验室，应立即向老师报告。 吸过或沾有细菌的吸管要放入指定的玻璃筒内，用过的载玻片亦放入指定的玻璃缸中，其他带菌物品亦放入指定地点，不可随便乱放。 实验前后要检查所用器材，如有损坏或缺少时应立即报告老师。 实验过程中随时整理桌面，实验器材准确归位。需要培养的物品放入指定容器内，值日生清洁实验室，其他同学洗手后离开实验室。 2.显微镜使用（油镜） 讲解 3.细菌的基本形态观察 球菌 （葡萄球菌） 球菌 （链球菌） 杆菌（大肠杆菌） 弧菌（霍乱弧菌） 4. 细菌染色法1:革兰染色 （葡萄球菌、大肠杆菌） 个人操作 葡萄球菌 大肠杆菌 1. 制片 操作步骤（continued） （1）涂片 （2）干燥 （3）固定 操作步骤（continued） 2. 初染 滴加结晶紫染色1-3分钟，流水冲洗。 3. 媒染 轻轻甩干，并用碘液覆盖30-60秒，流水冲洗。 操作步骤（continued） 4. 脱色 将玻片插入酒精缸，上下来回2-3次，直至玻片滴出来的酒精无紫色时，立即流水冲洗。 Notes: 乙醇脱色时间是关键环节: 脱色不足，阴性菌被误染成阳性菌； 脱色过度，阳性菌被误染成阴性菌。 脱色时间一般为3-5s左右。 操作步骤（continued） 5. 复染 用沙黄复染约60-90秒，水洗。 6. 镜检 干燥后，用油镜观察。 大肠杆菌 葡萄球菌 方法： 标本 初染（结晶紫 1-3分钟） 媒染（卢戈氏碘液 30—60秒 脱色（95%酒精 3—5秒） 复染（沙黄 90秒） Gram stain 革兰染色 阳性positive（紫兰色） 阴性negative（红色） 干燥、固定 油镜镜检 注意：使用完酒精灯后，请随时将酒精灯火焰扑灭！！ 流水冲洗 流水冲洗 流水冲洗 流水冲洗 *