DNA的粗提取与鉴定_百替生物.pdfVIP

高考第一轮复习讲学稿二二 DNA 的粗提取与鉴定（选修IP54） 一、实验目的：初步掌握DNA 的粗提取和鉴定的方法。 二、实验原理： 1．DNA 的溶解性： 思考题1：DNA 在氯化钠溶液中的溶解度有什么特点？对此有什么应用？ 思考题2 ：利用什么原理来将DNA 与蛋白质分离开？ 2 ．DNA 对酶、高温和洗涤剂的耐受性：蛋白酶能水解蛋白质，但对 DNA 没有影响。大多数蛋白质 不能忍受60~80℃的高温，而DNA 在80℃以上才会变性。洗涤剂能够瓦解细胞膜，但对DNA 没 有影响。 3．细胞在蒸馏水中易吸水而导致细胞膜和细胞核膜的破裂，据此可得到含有核DNA 的溶液。 4．DNA 的鉴定： 思考题3：依据什么原理来鉴定DNA？ 三、实验材料：鸡血细胞液 思考题4 ：生活在牧区的人们，采集牛、羊和马血比较方便，他们能否选用牛、羊、马血做实验材料？ 为什么？ 四、实验步骤： 1．制备鸡血细胞液：在鸡血中加入质量浓度为0 ．1g/mL 的柠檬酸钠溶液，离心处理； 2 ．提取鸡血细胞的细胞核物质：向鸡血细胞液中加入蒸馏水，搅拌、过滤； 思考题5：加入蒸馏水的目的是什么？为什么能达到此目的？ 3．溶解细胞核内的DNA：加入2mol/L 的氯化钠溶液，搅拌，使DNA 呈溶解状态； 4 ．析出含DNA 的黏稠物：加入蒸馏水，用玻璃棒搅拌； 思考题6：此时加入蒸馏水的目的是什么？ 5 ．滤取含DNA 的黏稠物：过滤； 思考题7 ：这次过滤与上次过滤的目的一样吗？为什么？ 6 ．将DNA 的黏稠物再溶解：加入2mol/L 的氯化钠溶液，搅拌，使DNA 呈溶解状态； 7 ．过滤含有DNA 的氯化钠溶液：过滤； 思考题8：这一步骤的目的是什么？ 思考题9：为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质？ 8．提取含杂质较少的DNA：加入冷却的95%的酒精，搅拌； 思考题10：这一步骤的目的是什么？ 思考题11：为什么加入的酒精需要冷却的？ service@100 9．DNA 的鉴定：取两支试管，各加入0 ．015mol/L 的氯化钠溶液5mL，一支加入提取的DNA ，两支 各加入4mL 的二苯胺试剂。混合均匀后置于沸水中加热。 思考题12：为什么要设置对照组？实验中能观察到什么现象？ 五、课堂练习： 1．为了便于提取鸡血细胞中的DNA，下列所采取的措施中，最恰当的是：向经抗凝剂处理的鸡血液加 入 （ ） A．蒸馏水 B．ATP C．0.3g/mL 的蔗糖溶液 D．二氧化碳 2．下列不适宜作为DNA 提取的实验材料是 （ ） A．鸡血细胞 B．蛙的红细胞 C．人的成熟红细胞 D．菜花 3．用过滤的方法得到细胞中的氯化钠溶液后，还要用酒精处理，可以得到较纯化的DNA．这是因为： （ ） A．DNA 易溶于酒精，而滤液中某些杂质不易溶于酒精 B．DNA 不易溶于酒精，而滤液中某些杂质易溶于酒精 C．DNA 和滤液中其他成分更易溶于酒精 D．DNA 和滤液中其他成分都不溶于酒精 4．（多选）下表是关于 DNA 粗提取与鉴定实验中所使用的材料、操作及其作用的表述．正确的是： （ ） 试剂 操作 作用 A 柠檬酸钠溶液 与鸡血混合 防止血液凝固 B 蒸馏水 与鸡血细胞混合 保持细胞形状 C 蒸馏水 加入到溶解有DNA 的NaCl 中 析出DNA 丝状物 D 冷却的酒精 加入到过滤后DNA 的NaCl 中 产生特定的颜色反应 5．在进行DNA 粗提取实验时，为得到含DNA 的黏稠物，某同学进行了如下操作： ① 在新鲜鸡血中加入适量的柠檬酸，经离心后，除去血浆留下血细胞备用。 ② 取5―1