MTT试验中细胞特性状态及细胞数与OD值的关系探讨.pdf.pdfVIP

维普资讯 杨 浩等：MTT试验中细胞特性状态及细胞数与OD值的关系探讨 49 MTT试验中细胞特性状态及细胞数与OD值的关系探讨 杨 浩，王春婷 ，吴玉梅 ，李静雯，鞠 躬 (第四军 医大学全军神经科学研究所细胞生物学研究室，陕西西安 710032) 中图分类号 ：O611．65；Q421 文献标识码 ：A 文章编号：1007—5038(2002)05—0049—03 摘 要 ：MT,T 比色法是用于检测体外培养细胞 37℃、5 CO 培养箱 中培养，第 2天每孔加入阿糖胞 生长存活及数 目的方法之一。细胞特性、接种密 苷 (Ara—C)抑制非神经元细胞 的增殖，作用终浓度为 度是否理想直接关系到实验结果的准确性和客 10tlmol／L，继续培养 48h后 ，更换新鲜 的培养液 ，用 于损伤实验和MTT活性检测实验。 观性 ，为 了进一步提 高MTT 法在不 同条件下 1．2 PC12细胞 的培养 检测细胞活性 的灵敏性和显著性 ，本文 以神经 用含 10 小牛血清的DMEM 将复苏好的 PC12 细胞及 PC12细胞为实验材料 ，探讨 了它们在 细胞调整浓度至 1×10／mL，接种在 25cm 的塑料培 正常及病理生长状态下，细胞数 目与 MTT法 养瓶 中，于 37℃、5 CO 培养箱 中进行培养，待细胞 所得细胞 活性 的 OD值 之 间的关系，比较 了不 生长至对数生长期时，将细胞置于 4℃约 30min，使细 同数 目细胞活性 OD值之 间的差异 ，最后得到 胞 同步化，然后吸弃培养液，用DSG1一H平衡液冲洗 2 OD值有显著性差异 的最佳细胞浓度范 围。 次 ，再用 10％小牛血清+5％马血清的DMEM 进行吹 关键词：MTT；细胞培养；活性 吸，制成细胞悬液，分别以 1×10～2×10等 8个浓度 近年来，随着神经生物学的发展，许多促进或抑制 接种在 96孔培养板 中，于 37℃、5 CO 培养箱 中培 神经细胞生存、生长、发育、分化的物质不断发现 。神经 养，用于损伤实验和MTT活性检测实验。 细胞原代培养和经过诱导后具有神经元特性的细胞系 1．3 两种细胞在不 同接种密度下的损伤实验 (如 ：PC12细胞)培养是作为研究神经药理、神经毒理、 将准备好的神经元细胞和PC12细胞在损伤实验 病理生理等方面的很好模型。为此观察和分析神经元、 前更换新鲜培养液，然后每孔加入FeSO和HO ，使其 前 体细胞和经过诱 导后具 有神经元特性的细胞 (如 终浓度分别为 100~mol／L和 50~mol／L，再于培养箱 PC12细胞)的一些检测方法也相继 出现 。MTT 比色法 中继续培养20min进行一OH 自由基损伤。弃去培养上 作为许多检测指标 中的一个方面 ，它在一定程度上可 清，用新鲜的DMEM 培养液清洗一次，然后再培养 24 以反映细胞的活性或存活数 目E1~43，其优点是快速、敏 h，进行 MTT实验 。 感 。但是否生物学特性不同的细胞在相 同或不同条件 1．4 细胞数吸光值 的关系 下都可 以通过MTT法反映出细胞 的生长、存活的状 待测细胞加入96孔板后培养 72h，然后每孔加入 态呢?MTT法在神经细胞学领域 中有关这方面的研究 10 的四唑嗅盐 (MTT)继续培养 4h，弃去培养液， 还未见报道 。本文就不 同特点的两种细胞在不 同条件 每孔加入 100 L二 甲基亚