奶牛猝死症的流行及其病原菌的分离鉴定.pdfVIP

现代畜牧科技 2015年第 1期总第 1期 ·67 · 奶牛猝死症 的流行及其病原菌的分离鉴定 周天德 (黑龙江省鹤岗市东山区人 民政府 154106) 1 流行病学 基 中37℃厌氧培养过夜 ，离心后 ，菌细胞重悬于含 溶菌酶 (2克 ／升)的 TE中，37℃孵 育 1小 时，然后 猝死症呈地区性散发 ，主要侵袭膘情较好 的幼 加入二烷基硫酸钠 (SDS)(终浓度为 1 )、乙二胺 龄家畜 。近年来 ，该病的发生出现了新特点 ，就是大 龄家畜的发病和死亡率有增加 的趋势 。本病冬 、春 四乙酸 (EDTA)(终浓度 5O毫摩尔 ／升)和蛋白酶 K (终浓度为 150摩克 ／升)，58℃水浴 4小时 ，用等体 季节发病较多 ，该病的临床特点为病程短 ，不见任何 积的饱和酚重复抽提 3次，吸取上层水相 ，加 1／5体 症状 ，突然发病 ，从发病到死亡 2小时左右，死前无 明显体温变化 ，在上槽 时才表现出采食量下降，精神 积的乙酸铵 (10摩尔／升)和 2倍体积的预冷无水乙 沉郁 ，全身肌 肉震颤，行走不稳 ，结膜发绀 ，呼吸急 醇 ，充分混匀后置室温沉淀 1O分钟 ，用玻棒挑取线 促 ，脉快而弱 ，流涎 ，随后倒地 ，四肢划动 ，迅速死亡 。 团状的染色体 DNA 沉淀至另一微量离心管 中，加 奶牛死亡后腹部迅速膨胀 ，口腔流 出红色泡沫样液 TE溶解 DNA，4℃保存。 体 ，舌脱出于 口外 ，肛 门外翻 ，呈角弓反张状态 。 4 结果 2 剖检变化 细菌分离培养结果 ：病死牛小肠 内容物、肝等病 死亡牛尸体外观营养状况 良好 ，天然孔无异常 ， 料在血液琼脂平板分离培养中未见细菌生长 。经厌 腹胀 。剖检以全身实质器官和小肠 出血为特征 ，心 氧培养的血液琼脂平皿上生长 出圆形、光滑、直径 肌质地变软 ，心房及心室外膜有 出血斑点 ；血液 暗 2～4毫米、边缘不整的灰黄色菌落 ，周围有 明显 的 红 ；颌下、肩前 、肠系膜淋 巴结水肿 ，切面有斑点状出 溶血环。厌氧 肉肝汤中均匀浑浊并产生大量气体。 血 ；肺气肿 ，有 出血症状 ；肝脏呈紫黑色 ，表面有 出血 镜检结果 ：油镜下可见短粗的革兰 氏阳性杆菌 ， 斑点 ；胆囊 、膀胱黏膜充血 ，有少量 出血点 ；脾脏无明 两端钝圆，单个或成双排列，具有明显 的荚膜 ，无鞭 显变化 ；瘤 胃、网胃、瓣 胃黏膜有散在 的针尖大 的出 毛 ，少数形成芽孢 。初步怀疑为产气荚膜梭菌。 血点 ，有的形成条状 出血斑 ；皱 胃充血 、出血 ；小肠浆 生化试验结果 ：分离菌能液化明胶 ；可还原硝酸 膜充血发红 ，黏膜呈现斑块状出血或弥漫性 出血 ；肠 盐；可分解葡萄糖、乳糖 、果糖 、麦芽糖 、蔗糖 ，产酸产 内容物为暗红色粘稠液体 。 气 ；过氧化氢酶试验阴性 ；不水解甘露醇 ；淀粉水解 试验阴性 ；不液化凝 固血清 ；牛乳试验呈暴烈发酵。 3 材料 与方法 PCR产物 电泳鉴定结果 ：经过 3O个循环后，扩 病料 ：猝死牛的小肠 内容物 、肝等 ；培养基 ：血液 增出了 目的基因片段