桃拉综合征病毒VP1高变区蛋白抗体制备及初步特性分析.pdfVIP

黄新新等 桃拉综合征病毒 VP1高变区蛋白抗体制备及初步特性分析 第 2期 doi：10．3969／j．issn．1000-484X．2015．02．017 桃拉综合征病毒 VP1高变区蛋 白抗体制备及初步特性分析① 黄新新 袁辰刚② 宁 雪② 顾 鸣② 蔡 强 刘 锐 陆承平③ (浙江清华长三角研究院，嘉兴 314006) 中图分类号 $945．4+6 文献标志码 A 文章编号 1000-484X(2015)02-0221-05 [摘 要] 目的：制备高效价的桃拉综合征病毒主要结构蛋白VP1高变区蛋白抗体 ，分析其免疫特性，为研究免疫诊断 试剂做参考。方法：将 pET—VP1重组载体转化人大肠杆菌 BL21，在IPTG诱导下进行表达。重组VP1蛋白纯化后免疫新西兰 家兔，用琼脂扩散试验及 ELISA检测抗体效价，用与VP1纯化蛋白特异性结合的单克隆噬菌体做竞争抑制试验。结果：pET— VPI重组蛋白在大肠杆菌BL21中呈可溶性高效表达。抗血清经琼扩试验鉴定效价达 1：2，ELISA效价达 1：2”。与VP1蛋白 特异结合的单克隆噬菌体能阻断部分抗血清与VP1蛋白的结合活性，但不影响最终检测阳性的判断。结论：制备的VP1高变 区蛋白抗体效价高，VP1蛋白少数区域的位点变异并不影响多克隆抗体的结合活性 ，可用作免疫检测诊断试剂。 [关键词] 桃拉综合征病毒；VP1蛋白；多克隆抗体；竞争抑制反应 Polyclonalantibody specificforhypervariableregion ofVP1capsid protein of Taurasyndromevirus(TSV)prepartionandcharacteristicanalysis HUANGXin—Xin，YUANChen—G0 ，NINGXue，GU ng，CaiQiang，U Rui，LUCheng—p ．EcologicalandEn— vironmentalResearchInstitute，YangzteDeltaRegionInstituteofTsinghna University，Zhejiang，fiaxing314006，China [Abstract] Objective：Preparationandimmunecharacteristicanalysisofpolyelonalantibodyagainsthypervariableregion proteinofTaurasyndromevirusmajorcapsidproteinVP1asareferenceforstudiesonimmunologicaldiagnosisreagent．Methods：The recombinantvectorpET—VP1wastrnasformedintoE．coliBL21forproteinexpression．ImmunizingaNew Zealandrabbitwithpurified VPIprotein，thefiterofanti-VP1senlm wasdeterminedbyAgardiffusiontestandELISA．Monoclonal phagespecificbindingtothe purifiedVP1proteinwasusedofrcompetitiveinhibition test．Results：TheVP1protein wassolubleandhighexpression in E．coli BL2I．Thebiologicalactivitytiterofanti-VP1serum reached1：2。．1：2”determinedbyAgra diffusiontestandELISA respectively．A litterbindingactivity ofantiserum andVPIproteincouldbeblockedbymonoclonalphage，butwouldnotaffectthefinalpositive result．Conclusion：Hightiterantibody Preparation oftheVP1hypervariableregion protein．Thebindingactivityofthe polyclonal antibodywithVP1proteinwasnotaffectedbythemutationsofVP1proteininminorityareas，SOtheantiseurm couldb