基于反相色谱的集成化蛋白质分析平台的初步构建.pdfVIP

第十七届全国色谱学术报告会及仪器展览会会议论文集 P．H028 基于反相色谱的集成化蛋白质分析平台的初步构建宰 周愿叩，袁辉明咖，孙良亮妒，张丽华扩，梁振a，张玉奎8 4中国科学院分离分析重点实验室，国家色谱研究分析中心，大连化学物理研究所，大连1160231 “中国科学院研究生院，北京，100039 关键词：反相色谱，酶反应器，膜接口，蛋白质 1 引言 在蛋白质组学研究中，与肽段分级相比，蛋白质水平上的预分离更有利于后续的蛋白质鉴定 【l，2】。然而，传统的方法是将蛋白质分离后，收集馏分并进行离线酶解，再将酶解产物经液相色谱 分离后，送入质谱进行鉴定。这种方法不仅需要的样品量相对较多，而且离线酶解费时费力、容易 造成样品损失。此外，也很难实现样品的高通量分离鉴定。因此，构建集成化的蛋白质分析平台不 仅可实现样品的自动化分析，而且还能显著提高蛋白质鉴定的准确性。 本文构建了一种基于反相色谱的集成化蛋白质分析平台。先通过反相色谱对蛋白质进行预分离， 随后通过中空纤维膜接口去除样品馏分中的有机溶剂并调节pH值，再依次进入酶反应器在线酶解。 最后将酶解产物通过反相色谱分离后送入质谱进行鉴定。以牛血清白蛋白为样品，对该平台进行了