酶工程 教学课件 作者 梁传伟张苏勤 主编 胡本高 主审 第四章.pptVIP

尚辅网 尚辅网 酶工程 第四章 酶的分离纯化 第一节 细胞破碎 一、机械破碎法 利用机械力的搅拌，剪切、研碎细胞。常用的有高速组织捣碎机(Waring blender)、高压匀浆泵(国外称Manton-Gaulin)、玻璃或Teflon研棒勾浆器(国外称Potter-E1vehem homogeniver)、高速球磨机或直接用研体研磨等。动物组织的细胞器不甚坚固、极易匀浆，一般可将组织剪切成小块，再用匀浆器或高速组织捣碎器将其匀质化。匀浆器一次处理容量约50mL，高速组织捣碎器容量可达500—1000mL左右。高压匀浆泵非常适合于细菌、真菌(如酵母)的破碎，且处理容量大，一次可处理几升悬浮液，一般循环2—3次，足以达到破碎要求。 第一节 细胞破碎 二、超声波法 超声波是破碎细胞或细胞器的一种有效手段。经过足够时间的超声波处理，细菌和酵母细胞都能得到很好的破碎。若在细胞悬浮液中加入玻璃珠，时间可更短些，一般线粒体经过125W超声处理5min可全部崩解。超声波破碎一次处理的量较大，超声效果以探头式超声器较水浴式超声器更佳。超声处理的主要问题是超声空间局部过热引起酶活性丧失，所以超声振荡处理的时间应尽可能短，容器周围以冰浴冷却处理，尽量减小热效应引起的酶的失活。 第一节 细胞破碎