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第十七届全国色谱学术报告会及仪器展览会会议论文集 P．G003 颗粒固定化整体柱在蛋白质组分析中的应用 关霞，晏国全，张祥民 复旦大学，上海200433 制备了一种新型的颗粒固定化整体毛细管柱并将其应用于肽、标准蛋白及实际蛋白样品的富集， 0象’r富集条件对于富集效果的影响，并在最佳条件下进行富集实验，计算了其回收率。对于肽、 标准蛋白回收率分别为100％，90％。对于实际蛋白样品，可能是由于其复杂性导致整体预柱富集后 盐类及一些亲水性蛋白的损失。 关键词：整体预柱，富集，毛细管色谱 l 整体预柱的制备 1．1毛细管柱的填充 C18填入3209m内径 以甲醇为顶替剂，在300bar压力下，采用高压匀浆法将51．tm的Hypersil 的毛细管中，填满后在填充压力下超声30分钟，以保证填充颗粒的紧密、均匀。 1．2整体预富集柱的制备 按照文献【1】报道的方法制备了颗粒固定化整体毛细管柱，我们优化了溶胶凝胶的配方：359L甲 基三乙氧基硅烷，120}tL二氯甲烷，65I_tL三氟乙酸和6¨L的水。 2 实验装置 To辩=p且硎on Frome,luent pump —．．…·～ F．miehment Sel谢ation 图1．预柱富集和分离模式下的示意图 实验装置如图1所示。在富集模式下，将样品上样到5mm长的整体预富集柱上，以纯水为上样 液，由等度泵上样一段时间。再通过阀的切换，由梯度泵将富集在预柱上的样品洗脱到分析柱上进 行洗脱分离。可以通过比较直接进样到分析柱上与经预柱富集后再洗脱到分析柱上的峰面积计算预 柱的回收率。 蔓±主鱼垒里墨堂兰垄塑童垒垦垡墨墨蔓量垒望丝壅墨 3结果与讨论 3I细胞色素C酶解肽段的童集实验 后．洗脱到分析柱上，色谱分离后谱图如图2所示。计算颈柱对细胞色素c酶解肚段回收率为100％。 幽2预柱亩集细胞色囊c酶舸肚段后冉＆升析柱色谱分离的诗圈 32标准蛋白的膏集实验 5ram长的预高巢柱对于细胞色素c，牛胰核_E『酸酶．马肌红蛋白．鸡卵白蛋白f谱豳由左至右为 该四种物质)寓集井洗脱谱图为幽3，回收率为90％。 圈3预柱高集标准虽自浒液的潜圈 3．3鼠肝蛋白的童集实验 水提鼠肝蛋白定量后浓度为2lLg／gL，取4pg进样到预官集柱系统中．图4为富集前(红)后(蓝) 的毛细管液相色谱圈．盐共及亲水性组分有较大损失，疏水性组分基本都富集到了。因此预富集柱 可应用于复杂蛋白样品的除盐。 圈41预富集拄富集鼠肝蛋自前(红)后(蓝)的毛细管渡相色谱圈 947 第十七届全国色谱学术报告会及仪器展览会会议论文集 4 结论 实验结果表明，一种新型的颗粒固定化整体预富集柱对于肽、标准蛋白及实际蛋白样品的富集 都具有好的效果。相比较而言，实际蛋白样品中亲水性分子损失较大，但这并不影响预柱在蛋白质 组领域的应用，而实现其对复杂样品除盐，富集功能。 参考文献 Gu，Yan Zhang．Journal 【1】Xue Wang,XiangminofChromatography八2005，1072：223—232