中国沙棘子叶原生质体游离与其膜片钳全细胞记录研究初报.pdfVIP

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2017-08-19 发布于安徽
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中国沙棘子叶原生质体游离与其膜片钳全细胞记录研究初报.pdf

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D。ctotal ⑧2006 F。吣ofChina 中国沙棘子叶原生质体游离及其膜片钳全细胞记录研究初报朱俊英闫慧尹伟伦t 高荣孚t (北京林业大学生物科学与技术学院，北京100083) 摘要：首次报道了适合膜片钳实验的耐盐木本植物中国沙棘子叶原生质体的游离条件，即取当天脱壳的子叶，放入渗透势为O．88M，pH为5．8，酶液组分为1．0％celhilaseR-IO、0．05％PectolyaseY-23、0．15％MacrozymeR-10、O．1％ Hemicellulase、0．1％BSA、O．1％PVP-40、2mMmMMes和5mM CaCl2、10 Vc的溶液中，在26℃、黑暗条件下，静 700B放大器和Clampcx9．2软件，记录到了该原生质体质膜全细胞内向K+通道电流置4h。并且利用Multiclamp 观察原生质体表面残余的细胞壁，并用于鉴定原生质体质膜能否与玻璃微电极管尖端形成高阻封接，前提是原生质体质膜未受到严重损伤。这为沙棘属木本植物细胞电生理特性及其耐盐机制关系的研究奠定了基础。关键词；中国沙棘。子叶，原生质体，游离，膜片钳，K+通道，非选择性阳离子通道，全细胞记录 and cell Zhu holafion whole of Junying；YanHui；YinWeilun；GaoRongfu．Protoplastspatchclamp recordingHippophae rhamnoides Cotyledon． of Scienceand CollegeBiological Biotechnology,BeijingForestryUniwrsity,Beijing，100083，P．R．China were isolatedfromtheseedleavesthatweretakenofftheseedouter atsame 4h by Protoplastssuccessfully coveringclay incubationinthedark solutionat26C．ThesolutioncontainsO．88MD-mannitol，5mMVc，2mM enzyme alz)，me CaCl2， 10mMMes，O．1％(w／v)BSA，O．1％(w／v)PVP-40，1．O％(w／v)CellulaseY-23， R-10，0．05％(w／v)Pectolyase 5．81．Patch whole-cell were clamp recordingtechniquesapplied 0．15％(w／v)MacrozymeR-10，O．1％(w／v)Hemicellulase(pH to K+channels non-selectivecationchannels study currents(-459．137pAand-290．