草莓镶脉病毒检测的一种新方法地研究.pdfVIP

第29卷专-T1 宁夏大学学报(自然科学版) 2008年7月 V01．29 Journalof Science Jul．2008 Spec NingxiaUniversity(NaturalEdition) 草莓镶脉病毒检测的一种新方法的研究 陈晓军1，陈虞超2，马洪爱1，郭生虎1，宋玉霞1 (1．宁夏农业生物技术重点实验室。宁夏银川750002； 2．宁夏大学生命科学学院，宁夏银川 750021) vein 摘要：以携带草莓镶脉病毒(Strawberrybanding 特异性扩增引物．以现行技术标准对照验证其准确性和可行性．通过RNA反转录扩增内标基因、病毒特异性序列和技术标准特异 性序列，扩增产物大小分别为295bp，289bp，600bp，与设计一致．实验表明，此算法得到的特异性引物能较好地满足草莓病毒检 测的标准．从而为草莓病毒的准确、快速检测方法提供了一条新途径． 关键词：萆莓病毒，SVBV，Insignia 分类号：(中图)Q946．91 文献标志码：A 草莓病毒病在世界各地分布广泛，削弱植株牛长势，降 1．1植物材料 低产量和品质，危害草莓生产．目前已报道的町侵染草莓的 携带草莓病毒SVBV的草莓叶片材料由宁夏自治区农 vein 业生物技术重点实验室提供． 病毒有20多种，其中草莓镶脉病毒(Strawberrybanding 1．2生化试剂与分子生物试剂盒 virus，SVBV)是危害草每较为严重的一种潜隐性病毒，也是 J． RNA提取试剂盒购于天泽生物公司；反转转录试剂盒 危害我国草莓生产的4种主要病毒之一¨。3 nlarker 目前，已经知道了数百种细菌和病毒的基因组序列，研 购于promega生物公司；DNAD2000，PCR扩增试剂盒 究人员能够根据它们的DNA来设计可迅速检测这些种类存 购于北京天根时代生物公司．实验所用引物均由北京奥科生 在与否的方法．这些检测方法能够检测出一种复杂有机混合 物技术公司合成，其它化学试剂均为化学纯． 物中的某种病原物．美国马里兰大学的Adam Phillippy和同1．3实验方法 事开发了一种计算机程序，这种程序能够以比以往更高的精 确度确定出这些细菌、病毒中特异性的DNA标签．研究人员 Acces． 引物，从中优选一特异性片段来鉴定SVBV(GenBank 将这种新的计算机系统称之为Insignia，并且已经成功用于sion No．X9731M)，扩增产物为289 bp．根据文献”“1合成扩 鉴定46个霍乱弧菌．Insignia利用高效的运算法则，将已知 增SVBV特异性引物SVBV600，扩增产物为600bp(命名为 的细菌和病毒基因组相互比较，并与背景基因组(包括植 物、动物和人)进行比较．这个程序具有广泛的应用价值，如 AccessionNo．ABI 诊断人类感染以及检测水中的有害微生物．为了让不同学科 Actin295(命名为SVBV295)，扩增产物为295bp(命名为 的研究人员能够最充分地利用这个新成果，Insignia可以在