肠球菌随机引物扩增DNA多态性地分型研究.pdfVIP

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2017-08-19 发布于安徽
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肠球菌随机引物扩增DNA多态性地分型研究.pdf

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肠球菌随机引物扩增DNA多态性的分型研究首都医科大学附属北京友谊医院检验科(100050)刘淑梅许淑珍北京大学人民医院检验科张正王贺首都医科大学附属北京同仁医院检验科董云秋北京大学第一医院检验科张敏肠球菌是引起医院感染的重要病原菌之一。由 6．PCR模板的制备：基因组DNA提取见参考文于其多重耐药，而且对抗生素耐药性逐年增加，给临献。床治疗选药带来困难，故追踪其传染源、控制其感染 7．随机引物及PCR反应条件：从RAPD试剂盒已成为当务之急。随机扩增DNA多态性技术20条引物中筛选出1条最佳引物进行试验，引物序 (RAPD)是一种以PCR技术为基础的DNA指纹图谱鉴定技术，本文采用该技术对临床分离的肠球菌进 unit／td)，10 X DNA聚合酶1阻(1 X缓冲液2出，(10 行RAPD基因分型，了解北京地区多重耐药肠球菌 500 缓冲液由以下成分组成：KCl mmol／L；riffs．HCl RAPD基因分型情况，探讨RAPD分型法在肠球菌引 100 mmol／L；Triton mmol／L)；dNTP$ X一100；MgCl：20 起的院内感染研究的临床应用。 0．5ILl(10 mmol／L)(250／maol／L)；引物1．0tmaol／L，模 min 材料和方法板4出，双蒸水补足至20出。经94℃预变性3 后，再经94℃lmin，350C2min，72。C2mln，45个循环， 1．菌株来源：2001年1月至2003年12月北京 72。C延伸10min。扩增产物于1．8％琼脂糖凝胶中 4家教学医院的细菌室从痰、尿、血液等标本中分离 V2 电泳，电压50 h，溴化乙啶染色对PCR产物进行的不重复肠球菌340株，其中首都医科大学附属北检测。京友谊医院(Y)100株，北京大学人民医院(R)80 8．RAPD实验条件的优化：将模板原液作10、株，北京大学第一医院(B)80株，首都医科大学附属 100、1000倍稀释，用于扩增。将引物稀释为0．25、北京同仁医院(T)80株。质控菌株：粪肠球菌 0．5、1、2,4 panol／L浓度。退火温度分别采用30、33、 ATCC29212。ATCC51299。 DNA聚合酶稀释为0．5、1、