常染色体显性多囊肾病患者和正常成人肾组织磷酸化蛋白质的比较蛋白质组学研究.pdfVIP

投稿论文 常染色体显性多囊肾病患者与正常成人肾组织 磷酸化蛋白质的比较蛋白质组学研究 第二军医大学长征医院 解放军肾脏病研究所(200003) 刘亚伟戴兵张岩熊锡山梅长林 dominant disease，ADPKD) 目的 目前常染色体显性多囊肾病(autosomal polycystickidney 发病机制还未完全阐明，现有研究表明蛋白质的磷酸化与去磷酸化在ADPKD发病中起着重要的 作用。但是传统针对单条信号转导通路以及其中单个蛋白磷酸化状态的研究策略，均存在一定局 限性，根本无法全面搜索多囊肾病发病中发生变化的磷酸化蛋白质，也无法系统地、完整地、全 面地阐述这错综复杂的信号转导通路网络。本研究利用比较蛋白质组学方法建立分辨率高和重复 性好的ADPKD患者肾组织及正常成人肾组织磷酸化蛋白质的双向电泳图谱，分析其差异表达的 总蛋白，进行磷酸化蛋白质的富集，而后对蛋白质进行浓缩、除盐等处理。采用固相pH梯度双向 凝胶电泳分离两组磷酸化蛋白样品，凝胶经银染显色后，PDQUEST分析软件进行比较分析，识别 差异表达的磷酸化蛋白质。选取感兴趣的差异点，进行胶内酶解，得到肽段混合物。应用反向液 位置上有较好的重复性。(2)质谱鉴定蛋白质分析：比较分析多囊肾病患者肾组织及正常成人肾 组织磷酸化蛋白质的双向凝胶电泳图谱，平均匹配的点数为755士23，对40个差异蛋白质点进行 RP-HPLC-ESI--MS／MS分析，鉴定出Ezrin-radixin-moesin bindingphosphoprotein50、tropomoesin、 AnnexinlI等参与信号转导、钙离子调控、细胞周期调控、细胞分化、细胞骨架蛋白调节、能量代 谢有关的蛋白质。结论本研究通过对磷酸化蛋白质进行提纯、富集，建立了分辨率高且重复性 较好的ADPKD患者肾组织及正常成人肾组织磷酸化蛋白质双向电泳图谱，并识别鉴定出一些与 ADPKD发病相关的磷酸化蛋白质，为进一步阐明ADPKD的发病机制提供依据。 306