不同粉尘对大鼠肺泡巨噬细胞表面受体MARCO表达影响的体外及研究.pdf

摘要 摘要 长期以来，尘肺病是中国职业病中发病率最高、对劳动者危害最为严重的 一类职业病。最新统计报告显示，2010年尘肺病发病例数占职业病报告总例数 的87．42％，而且其发病工龄有明显缩短的趋势，尘肺病的发生严重危害着职业 人群的健康状况及生活质量。多年来研究者一直致力于其发病机制的研究。 生产性粉尘进入肺部后，肺泡巨噬细胞作为参与机体防御的首类效应细胞， 在尘肺的发生发展中发挥着至关重要的作用。一直以来大多数的研究均致力于 粉尘作用于巨噬细胞后引起的一系列变化，然而有关巨噬细胞如何识别并吞噬 粉尘颗粒的过程尚不清楚，近年来国外有研究结果显示巨噬细胞对矽尘的吞噬 并非是简单的异物吞噬反应，而是通过巨噬细胞表面表达的模式识别受体 MARCO来介导的，这一发现为尘肺病的研究提供了新的线索。胶原样结构巨噬 with receptor 细胞受体(Maerophage eollagenous 面A类清道夫受体的一种。国外研究发现MARCO参与肺泡巨噬细胞对矽尘的 吞噬，而且矽尘作用于肺泡巨噬细胞后可以导致该受体表达的增加。 除了矽尘，其它很多粉尘也能引起尘肺病，在中国，煤尘所致的尘肺病要 高于矽尘，占据相当大的比例。而氧化锌粉尘则是一种重要的金属粉尘，也可 对肺部造成严重损伤。因此，基于国外的研究，煤尘和氧化锌粉尘与肺泡巨噬 细胞的作用方式是否也经MARCO受体而被肺泡巨噬细胞所吞噬引起了我们的 兴趣。因此，该研究拟通过体外实验，原代培养SD大鼠肺泡巨噬细胞，使用游 离$i02粉尘、煤尘以及氧化锌粉尘作用肺泡巨噬细胞，检测不同粉尘刺激对肺 泡巨噬细胞表面受体MARCO表达的影响，探讨肺泡巨噬细胞吞噬二氧化硅粉 尘、煤尘和氧化锌粉尘的方式。 目的： 检测游离Si02、煤尘以及氧化锌3种粉尘对肺泡巨噬细胞表面MARCO受 体表达的影响，探讨巨噬细胞对煤尘和氧化锌粉尘的吞噬作用方式。 方法： 1．对SD大鼠的肺泡巨噬细胞进行分离纯化和原代培养。 2．采用MTT比色法测定各粉尘对原代培养的巨噬细胞活性的影响，并确 定染毒巨噬细胞的粉尘浓度。 摘要 PCR检测不同浓度粉尘刺激后肺泡巨噬细胞表面清道夫 3．使用Real．time 受体MARCO的mRNA相对表达水平。 blot技术检测不同浓度粉尘刺激后肺泡巨噬细胞表面清道 4．采用Western 夫受体MARCO的蛋白表达水平。 5．统计学分析：使用SPSSl2．0统计软件，采用Levene方法进行方差齐性 检验，各组之间采用单因素方差分析，两两比较用g检验，统计学上的显著性 检验以a--0．05为检验水准。 结果： h后巨 1．分离得到的SD大鼠肺泡巨噬细胞的成活率在95％以上，培养2 噬细胞贴壁状态良好，纯化后巨噬细胞纯度达95％以上。 2．各粉尘对原代培养的巨噬细胞活性的影响t (1)游离Si02粉尘浓度为25lxg／ml、50gg／ml、100gg／ml时，巨噬细胞活 性与对照组0 I．tg／ml I．tg／ml进行比较，差异无统计学意义(伽．05)，当大于100 浓度时，细胞活性明显受到影响，因此，游离Si02粉尘对细胞的染毒浓度设定 lag／ml、50gg／ml、75gg／ml、100I_tg／m1)； 在100}lg／ml以内(0txg／ml、25 (2)煤尘浓度为50 pg／ml、100pg／ml、200pg／ml、400Ixg／ml时，细胞活 gg／ml浓度 性与对照组01tg／ml比较，差异无统计学意义(尸O．05)，当大于400 时，细胞活性较对照组明显降低。因此，煤尘