微生物诱变育种技术——离子注入法.pdfVIP

维普资讯 SC皿NCE＆TECHN0L0GY F0RIAT卫ON 2007年 第20期 微生物诱变育种技术 离子注人法 汪伟明 (南京农业大学生命科学院 江苏 南京 210036) 摘要 ：离子注入法作为一项微生物新型物理诱变方法 已经得到 了广泛的应用并且取得 了相3-的成就 。本文主要介绍这种新型方法的机理 与应用方法．并对它的成效及未来前景作简单描述。 关键词：离子注入 ；诱变育种方法；前景 离子注入诱变育种技术是近些年发展起来的物理诱变技术。该技 等 初步研究了无菌水、无菌水生理盐水、无菌脱脂奶保护剂对菌膜 术 以较小的生理损伤得到较高的突变率、较广的突变谱 ，而且具有设 菌株活性的影响，发现保护剂保护作用强，但是影响离子注入 ，起到能 备简单 、使用方便，成本低廉、对人体和环境无害等优点口l，尤其在微生 量反射和屏蔽作用；无菌生理盐水对菌株的活性保留最大。这方面研 物诱变育种的研究中，利用离子注入进行菌种改 良已在生产实践中得 究需要进一步确定保护剂，力求离子注入时活菌细胞最多。 到广泛应用 。 另外．H十、N+、Ar~离子是常用的诱变剂，其中N最常用。注入能量 1．离子注入法的作用机理 为20key一30key．注入剂量0(对照卜106ion／era2之间，脉冲式注入 ，每次 离子注入法是利用离子注入设备产生高能离子束(40—60kev)并注 连续注入 的时间和间隔时间因处理的种类不同而各异，温度应控制 入生物体引起遗传物质的永久改变，然后从变异菌株中选育优 良菌株 50℃以下，真空度为 10-3pd．1 。这只是常用量，针对不同菌种要进行 的方法 。 适 当的调节 。 中国科学院等离子体研究所的研究人员从原初物理过程分析人 3．离子注入法在实际中的应用 手 ，提出离子注入对生物体的作用是集动量传递 、能量、质量沉积4[1和 离子注入微生物育种的研究近几年发展非常迅速。主要集中于工 电荷 的中和与交换 于一体的联合作用的观点，不断得到实验的证实。 业微生物优 良菌株的选育或改 良，以获得高收率的 目标产物为 目的。 其中，能量沉积指注入的离子与生物体大分子发生一系列碰撞并 3．1离子注入法在发酵工业中的应用 逐步失去能量 ．而生物大分子逐步获得能量进而发生键断裂、原子被 离子注入能打破传统诱变方法中多次诱变导致的负突变和抗性 击 出位、生物大分子留下断键或缺陷的过程 ；质量沉积指注入的离子 饱和．获得 以目标产物为 目的的高产、优 良菌株_l目。 与生物大分子形成新的分子；动量传递会在分子 中产生级联损伤 ：电 许安等[12-以生产VC的2一酮基一L一古龙酸高产菌系为出发菌株， 荷交换会引起生物分子 电子转移造成损伤 ．从而使生物体产生死亡、 进行离子注入育种，选育出了高产菌系：糖酸转化率提高 15％一20％、4 自由基间接损伤、染色体重复、易位、倒位或使DNA分子断裂、碱基缺 代传种平均转化率达 95％，并进行了培养基优化和摇瓶发酵检测，为 失等多种生物学效应6[-。同样离子注入与微生物细胞的相互作用也 所选的IPPM-1028菌系的扩大生产提供了依据。虞龙等[1司则利用H+、 被实验所验证 。 N 、Ar三 种离 子 注入 vC发 酵 大菌 一巨大 芽孢 杆 菌 fBacillus 2．离子注入法的装置与操作步骤 megaterium)．确定了最佳的离子注入剂量 ．选 出了4株改 良菌株进行 2．1离子注入装置一离子注入机 工业化生产。180M2、300M 发酵罐 300批次的实际生产，平均糖酸转 离子注入