生物大分子的浓缩干燥和保存方法.pdfVIP

中国试剂网 2.4.79 生物大分子的浓缩干燥和保存方法 一、样品的浓缩 生物大分子在制备过程中由于过柱纯化而样品变得很稀，为了保存和鉴定的 目的，往往需要进行浓缩。常用的浓缩方法的： 1、减压加温蒸发浓缩 通过降低液面压力使液体沸点降低，减压的真空度愈高，液体沸点降得愈低， 蒸发愈快，此法适用于一些不耐热的生物大分子的浓缩。 2 、空气流动蒸发浓缩 空气的流动可使液体加速蒸发,铺成薄层的溶液，表面不 断通过空气流；或将生物大分子溶液装入透析袋内置于冷室，用电扇对准吹风， 使透过膜外的溶剂不沁蒸发，而达到浓缩目的，此法浓缩速度慢，不适于大量溶 液的浓缩。 3、冰冻法 生物大分子在低温结成冰，盐类及生物大分子不进入冰内而留在液相 中，操作时先将待浓缩的溶液冷却使之变成固体，然后缓慢地融解，利用溶剂与 溶质融点介点的差别而达到除去大部分溶剂的目的。如蛋白质和酶的盐溶液用此 法浓缩时，不含蛋白质和酶的纯冰结晶浮于液面，蛋白质和酶则集中于下层溶液 中，移去上层冰块，可得蛋白质和酶的浓缩液。 4 、吸收法 通过吸收剂直接收除去溶液中溶液分子使之浓缩。所用的吸收剂必需 与溶液不起化学反应，对生物大分子不吸附，易与溶液分开。常用的吸收剂有聚 乙二醇，聚乙稀吡咯酮、蔗糖和凝胶等，使用聚乙二醇吸收剂时，先将生物大分 子溶液装入半透膜的袋里，外加聚乙二醇复盖置于 4 度下，袋内溶剂渗出即被聚 乙二醇迅速吸去，聚乙二醇被水饱和后要更换新的直至达到所需要的体积。 5、超滤法 超滤法是使用一种特别的薄膜对溶液中各种溶质分子进行选择性过滤 的方法，不液体在一定压力下（氮气压或真空泵压）通过膜时，溶剂和小分子透 过，大分子受阻保留，这是近年来发展起来的新方法，最适于生物大分子尤其是 蛋白质和酶的浓缩或脱盐，并具有成本低，操作方便，条件温和，能较好地保持 生物大分子的活性，回收率高等优点。应用超滤法关键在于膜的选择，不同类型 和规格的膜，水的流速，分子量截止值 （即大体上能被膜保留分子最小分子量值） 等参数均不同，必须根据工作需要来选用。另外，超滤装置形式，溶质成份及性 中国试剂网 2.4.79 质、溶液浓度等都对超滤效果的一定影响。Diaflo 超滤膜的分子量截留值： 膜名称 分子量截留值 孔的大的平均直径 XM －300 300 ，000 140 XM －200 100 ，000 55 XM －50 50 ，000 30 PM －30 30 ，000 22 UM －20 20 ，000 18 PM －10 10 ，000 15 UM －2 1 ，000 12 UM05 500 10 用上面的超滤膜制成空心的纤维管，将很多根这样的管拢成一束，管的两端 与低离子强度的缓冲液相连，使缓冲液不断地在管中流动。然后将纤维管浸入待 透析的蛋白质溶液中。当缓冲液流过纤维管时，则小分子很易透过膜而扩散，大 分子则不能。这就是纤维过滤秀析法，由于透析面积增大，因而使透析时间缩短 10 倍。 二、干燥 中国试剂网 2.4.79 生物大分子制备得到产品，为防止变质，易于保存，常需要干燥处理，最常 用的方法是冷冻干燥和真空干燥。真空干燥适用于不耐高温，易于氧化物质的干 燥和保存，整个装置包括干燥器、冷凝器及真空干燥原理外，同时增加了温度因 素。在相同压力下，水蒸汽压随温度下降而下降，故在低温低压下，冰很易升华 为气体。操作时一般先将待干燥的液体冷冻到冰点以下使之变成固体，然后在低 温低压下将溶剂变成气体而除去。此法干后的产品具有疏松、溶解度好、保持天 然结构等优点，适用于各类生物大分子的干燥保存。 三、贮存 生物大分子