护肝宁对CCL4诱导肝细胞损伤保护作用地研究.pdfVIP

3讨论 NASH是现代医学概念，根据临床表现归属“肝癖”、“胁痛”、“肝著”范畴。由过食肥甘、多卧 少动、情志失调等因素，致肝失疏泄、脾失健运，湿、痰、瘀交织互结，阻滞肝络，致肝气郁结、 疏泄失职，湿、痰、瘀停留肝脏而发病。因而治疗上以泽泻、丹参为君药，化痰活血，利水祛湿： 郁金、海藻、山楂为臣药，助君药化痰消瘀，行气活血；决明子与水飞蓟为佐药祛瘀血日久所化之 热；柴胡为使药，疏肝理气，引药归经；全方共奏清热利湿、活血祛瘀、理气化痰之功。 NASH病理机制复杂，然近期研究表明，内脏脂肪组织与代谢、炎症密切相关，其分泌的促炎 和抗炎脂肪因子间的平衡失调可能是发病关键，ADPN是具有良性调节的脂肪细胞因子，参与糖脂 代谢、炎症等病理生理过程，具有胰岛素增敏、抗高血糖、抗动脉粥样硬化等作用。流行病学调查 证实，低脂联素血症是NAFLD和肝功能障碍的独立危险因素，而NASH的患者血清脂联素含量比 的因素之一，脂联素受体的上调能够促进脂质代谢，缓解NASH的发生。AMPK是细胞内能量代 谢调节因子，它的活性是通过感应细胞胞浆的AMP／ATP比值，调节细胞内糖脂代谢。活化的AMPK 脏FFA的合成。 ACC mRNA表达，同时调控肝组织中其蛋白表达量，减少组织中FFA含量。说明通过化痰祛湿活 胆固醇的合成原料下降，减少肝细胞脂肪沉积；另一方面AMPK负性调节ACC活性，增加CPT-1 表达，从而抑制脂肪酸的p氧化及合成，减少肝脏脂肪的含量，最终达到控制肝脏炎症反应的目的。 但是该方对ADPN／AMPK／ACC通路中靶向干预作用，有待于进一步研究。 护肝宁对CCL4诱导肝细胞损伤保护作用的研究木 朱方石1，吴晓燕1，姚莉2，陆霜红2 江苏省中医药研究院 南京中医药大学附属中西医结合医院江苏南京210028 护肝宁是用于“治疗急性肝炎、慢性肝炎、肝硬化及各种药物性肝损伤”的上市中成药，为进一 步揭示该药“保肝护肝”的作用机制，我们通过建立CCL4诱导肝细胞损伤模型和急性肝损伤大鼠模 型，籍以观察和了解护肝宁对肝细胞的保护作用及抗肝损伤的作用，现将结果报告如下。 1材料与方法 1．1材料： 伤模型及其对照)，体重150～1809，购于上海斯莱克实验动物有限公司，合格证号：SCXK(沪) 2007．0005；动物饲养环境：SPF级，合格证号：SYXK(苏)2007．0026。 1．1．2药品及试剂： 人肝L一02细胞，中科院上海细胞库；DMEM培养基，Gibco公司；小牛血清，杭州四季青公司； ·297· 江苏中医药研究院分子生物实验室配制提供：ALT、AST检测试剂盒，南京建成生物研究所；CCL4 分析纯，南京生化仪器厂。 1．1．3主要仪器： 德国罗氏公司。型倒置生物显微镜，Olympus公司；生物洁净工作台，美国Labconco公司；酶标 1．2方法： 分溶解后，于离心机8000转／分离心，去杂质，取其清液，定溶为70ml，经0．221ma微孔滤膜过滤 除菌后，终浓度为0．19／rIll，置4C冰箱保存，备用于制备含药血清。另同样配制护肝宁混悬液300ml， 备用于急性肝损伤模型成模抑制实验。 1．2．2含药血清的制备：取雄性SD大鼠3只，随机分成3组，即正常对照组(正常饲养)、CCL4 模型组(给予同体积生理盐水)、护肝宁血清组(0．11559／kg)，每组1只；除正常对照组外，其余 2组每日两次相应液体2．5ml灌胃，间隔12小时，连续给药3天。末次给药后1小时，全麻下腹主 存备用。 过滤灭菌，4℃保存备用。②胰蛋白酶溶液：称取0．259胰蛋白酶，加入80mlxPBS缓冲液，完全溶 MTT溶于4mL的PBS，充分溶解，4℃避光贮存。 20mg 1．2．4 L．02细胞的复苏与培养：预热培养基，30分钟后，向培养瓶中加入8ml已预热的培养基， 取出冻存于液氮中的L．02鲴胞株，迅速投至37℃的水浴锅中，不断振摇。取出冻存管，75％酒精 擦洗消毒，将冻存的细胞悬液吸至培养瓶中，混和均匀后，移入三气培养箱中37℃、5％C02条件 下培养。细胞长至90％融合时，接种细胞，加入0．25％胰蛋白酶，含10％新生牛血清的DMEM培 的孵箱培养24h。 1．2．5 CCIM诱导肝细胞损伤模型的建立：肝细胞培养12h后，吸弃上清，更换培养液并加入不