葛根素和牛血清白蛋白相互作用的光谱法研究.pdfVIP

化学工业及材料 葛根素与牛血清白蛋白相互作用的光谱法研究 田建袅 刘秀红赵彦春 赵书林 1 引言 葛根是豆科植物葛的块根，历代本草均有记载，葛属植物全世界有近18种。通常人药的是野葛的根。 近年来葛根的研究与开发逐渐受到关注。葛根是常用的中草药，其有效成分为葛根素。葛根素属异黄酮类 物质。结构见图l。因黄酮类物质具有独特的抗氧化能力和消除人体内过量活性氧自由基的特性，使其提 取和分析及应用普遍受到人们的重视。 药物与人类生活健康密切相关，药物分子只有进入人和动物体经转运达到靶位后才能发挥生物学效 应．血液是其主要载体。血清白蛋白是人和动物体循环体系中含量最丰富的蛋白质，承担着药物和营养物 质的转运，从而使各种物质达到身体需要的组织，维持人和动物体正常的生理活动。因此，药物在人体内 的代谢必然伴随着与各种蛋白质的相互作用，所以研究葛根素与血清白蛋白的相互作用，对临床上治疗以 及药物的药效学和药物动力学具有十分重要的指导意义。目前有关葛根素的研究工作已有很多，主要集中 于葛根的化学成分的分离、测定和分析应用，但有关葛根素与血清白蛋白相互作用的文献还未见报道。本 文主要采用荧光光谱法，系统地研究了葛根素与牛血清白蛋白(BSA)结合的机理、结合常数、结合位 点、结合的热力学参数、分子间的结合距离以及溶液的pH值、金属离子、离子强度和表面活性剂等条件 对结合作用的影响。通过实验研究发现：在葛根素与牛血清白蛋白相互作用的过程中，蛋白质上接近色氨 作用。 csntlOs 0H 图l 葛根素的化学结构图 2 实验部分 2．1仪器试剂 荧光光谱在LS55荧光光谱仪(Perkin 二色谱仪(Japan)扫描。体系的酸度利用pH3C型酸度计(上海雷磁仪器厂)调节测定。 第一作者系广西师范大学副教授、博士。 ·-——387．．—— 自然科学篇(下卷) 特斯化学技术有限公司，北京)溶于乙醇中，配制成1．5×10旬mol／L贮备溶液。将金属离子Fe“、 溶液。水为二次水。其余试剂均为分析纯。 2．2实验方法 用荧光光谱仪扫描溶液的荧光光谱图，记录光谱数据。同时分别以激发波长和发射波长之间的波长差为 Ak=15nm和60nm。用荧光光谱仪扫描上述溶液体系的同步荧光光谱图。 扫描其圆二色谱(CD)。 3结果与讨论 3．1光谱研究 3．1．1 葛根素浓度的增加，蛋白质荧光发射均发生了有效的猝灭，峰强度减弱，而在477nm处，药物一蛋白质 体系的荧光峰强度则随着药物浓度的增加，则逐渐增强，见图2。在410nm左右出现了等发射点，由此可 以说明，蛋白质与药物间发生有效的能量转移，二者发生相互作用。 度285K时该猝灭过程不是一动态猝灭过程，而应该是一静态猝灭过程，生成了一种非荧光基态配合物。 Wawlen州nml WavelenmMnm) lAl l劭 图2 (B)295nm，298K 由图3可知：当药物与蛋白质的浓度比≤6时，S—V曲线有较好的线性关系，而浓度比6时，S— V曲线有向上弯曲的趋势，即出现了S—V曲线线性偏差，说明在药物浓度较高时，荧光猝灭已不是单一 --——388．．．． 化学工业及材料 的静态猝灭，而是静态与动态综合作用的结果。同时在药物浓度较低时，由不同温度下所得的Stem— 药物与血清白蛋白主要是发生了一种静态猝灭的过程；当温度从298K提高到308K温度时，K。，的值反而 增大了。这可能是由于在葛根素与血清白蛋白的结合过程中，温度升高到一定值时，猝灭过程同时又包含 有一个动态猝灭的过程，从而利于药物与血清白蛋白的结合。因此在低温和低浓度下，药物主要是通过静 态猝灭的机理来猝灭蛋白质的荧光