谷氨酸高产菌GDK-9的定向选育和其发酵过程研究.pdfVIP

谷氨酸高产菌GDK．9的定向选育及其发酵 过程研究 杜军徐庆阳谢希贤刘淑云 陈 宁 利用微生物发酵法生产谷氨酸，迄今已有五十多年的历史。国外采用添加青霉素等方 采用生物素亚适量法发酵生产谷氨酸，平均产酸水平在1059，L，平均糖酸转化率为55％， 产酸水平和糖酸转化率与国际同行业尚有较大差距m31。对于氨基酸发酵工业来说，通过 生产菌种的定向选育并进行发酵过程优化以提高产酸水平是弥补国内外差距的最有效手 段。利用物理、化学诱变剂单独或复合处理菌体是选育高产菌株的经典方法。而对原生质 体直接进行诱变处理，不但简便易行，还可使诱变效果大为提高。原生质体诱变技术已经 被成功地运用于发酵法生产麦考酚酸、植酸酶、纤维素酶、葡萄糖氧化酶等菌种选育研究 中‘蜘，取得了很好的效果。本文依据代谢工程理论，运用原生质体诱变技术，结合紫外诱 变及化学诱变手段，以天津短杆菌GDK6为出发菌株，定向筛选出一株L．谷氨酸高产菌 GDK．9，并对该菌株的发酵过程进行了研究。 l材料与方法 1．1菌种 ‘ 天津短杆菌(Brevibacterium 藏菌种。 1．2培养基和主要溶液 活化斜面、原生质体再生等培养基以及青霉素溶液、高渗液、蛋清溶菌酶等溶液：见 参考文献【8】。 0．6，pH7．0。 0．6，尿素6(分 消)，pH7．0。 1．3实验方法 原生质体紫外诱变、紫外诱变和DES诱变：见参考文献【8】【9】。 种子培养：将1支生长良好的新鲜活化斜面菌种，用适量无菌水洗下，吸取1／4菌液 转入装有20mL种子培养基的500mL三角瓶中，8层纱布封口，置于追转式摇床上， 200rlmin，33C振荡培养至对数生长中后期。 —94— 瓶，发酵42h。 1．4分析方法 2．结果与讨论 2．1天津短杆菌GDK-9的定向选育谱图 天津短杆菌GDK6经原生质体紫外诱变、紫外诱变以及DES化学诱变，依次被赋予酮基 得一株L．谷氨酸高产菌GDK．9，其定向选育谱系见图l。 菌株 L谷氮酸产量(teL) 天津短杆菌GDK6 69．2 上原生质体紫外诗变(15w，1) GDK6l(KMo) 71．1 工I％DEs，∞_妇 GDK617(1函F+孽：Ar) 74．2 王絮井线(蝤w’I 76．3 GDK6172(KMr+FAr+SGr) 上1吼011]g$，撕呐 78．9 GDK61729(KMr+E+SG声+GLr) 工分膏纯化 GDK．9(KMr+E舻+S(y+GI，79．2 图1天津短杆菌GDK一9的定向选育谱系 2．2遗传稳定性试验 将目的突变株GDK．9进行单菌落分离，连续摇瓶传代10代，并进行遗传标记验证和摇 瓶发酵产酸试验，结果见表1。 表1 GDK．9遗传稳定性试验 传代数 2 4 6 8 10 遗传标记 + + + + + 谷氨酸／g，L 79．34 79．26