CdTe量子点荧光探针用于H5亚型禽流感病毒快速检测的新方法研究.pdfVIP

CdTe量子点荧光探针用于H5亚型禽流感 病毒快速检测的新方法研究 陈日平盛宗海张安定彝学波但汉并金梅棘 华中农业太学农业微生枷国末重点实验宣华十农业大学动抽Ⅸ学腕．武超，430070 I实验方法 1 1 CdTe量子点(QDs)的台成 在100mL四口圆底烧瓶中，加^超纯水晾干。通过有荧光滤片的多功能酶标仪测定个孔荧 36m1—0叭moll[，的CdCI2溶液】2mI。在氪气保光强度。 护下，加人巯基乙酸，用Imol／L的NaOH调节{铎液2．结果与讨论 的pH值为10。之后，依次加入001mol／L的亚碲 2．1 酸钠2mL．硼氢化钠0 量子点的紫外吸收光谱(图la)和荧光光谱(图 00249，充分搅拌后，加热回 流．反应不同时间可得到不同粒径的CdTe量子点。 Ib)表明，所制备的量子点具有良好的费光性能，平 均粒径约为33nm，与透射电镜检测所得结果一 1．2兔抗H5NI亚型禽流感病毒多克隆抗体的 制备及纯化 致，如图2。 将获得的HSNI亚型禽流感病毒重组m凝素 (HA)蛋白与弗氏完全佐剂馄台后免疫10周龄的 家兔，韧状免痤约lkg兔体重0lmg蛋白，第三周 H5HA蛋白与弗氏不完全佐 和第四周分别用5mg 剂混合后免痤，最后1次免疫10灭后采血。用辛 200凝腔 酸-硫酸铵盐法提取兔血清中IgG并用G 柱纯化”…。 m{b 1．3量子点抗体荧光搛针的制备 采用共价键连接法在量子点表而修饰抗体“1。 首先将量子点溶液与交联剂EDC(005M)和NHS (SmM)幌台．室温活化15rain，以5000r／rain离心3 t l 次，用PBS悬浮沉淀，然后加八摩尔比为l2的 兔lgG，在25℃摇床中反应2h．4℃过夜．离心取上 清液，4℃保存备用。 燮豢 1．4sFLIsA HSNI亚型禽流感病毒快速检测 目2 CdTe■}点∞％射电镰目 方法的建矗 将等量Q阻IgG藩渡与H5病毒藏混合，室温 夹心荧光免疫试验(sFl，ISA)在96孔聚苯乙烯 作用十分钟，用荧光仪检测加_凡抗原前后QDs-lgG 反应微孔中完成。微孔板先用100ⅡL音有140ng 的共振光散射光谱。结果显示，在相同条件下．加A 的扰HSNl弧型宙流感病毒重组HA蛋白的单克 6碳 抗原后，QDs—IgG的散射光强度明显增强，发射峰 隆抗体在4℃包被过夜(包被赦：005M，pH9 位荧光强度从47335增加到59809，如罔3所示。 酸盐缓冲液)，次日用洗涤渡(0 2PBS． 01M，pH7 0 说明QDsIgG荧光揉针与抗原结合，量子点发生了 05“的Tween)洗板2攻，2009L／孔，每次3min。 较小的团聚。 用5蹦脱脂乳封闭．300“L／孔，3TC作用1h．用上述 2 2敏感性分析 洗涤液洗板后，加入样品，100uL／孔。37℃孵育