莲房原花青素拮抗乙醇诱导肝细胞凋亡机制地研究.pdfVIP

莲房原花青素拮抗乙醇诱导肝细胞凋亡机制的研究 唐瑛，扬车，王小昆，左娟 (广州军区武汉总医院，武汉430070) 总称，广泛存在于葡萄、山楂、莲房(10res seedpod，LS)等多种植物中。初步研究发现其具有抗氧化、 抗衰老、抗癌等多种生物活性，是极具发展前景的天然植物提取物。但目前关于原花青素对酒精的拮抗 作用国内外尚未见报道，本实验通过研究莲房原花青素(LSPC)对乙醇引起的人胚肝细胞株L．02凋亡的 拮抗作用及其机制．为进一步开发利用原花青素提供实验依据。 1材料与方法 1．1主要试剂和细胞株莲房原花青素(LSPC)由武汉华中农业大学食品科技学院谢笔钧教授惠赠，批号 buffer 031019。原花青素含量大于98％，为棕褐色粉末，用磷酸盐缓冲液(phosphate lg／U储备液。无水乙醇(上海试一，分析纯)。人胚肝细胞株L-02购自武汉大学典型培养物收藏中心。 37℃常规培养。传代6次后，调整细胞计数至105／ml接种于培养瓶，取指数生长期细胞进行实验。实验 分别为5、10、25mg／L的LSPC，以上各组在无血清的培养液中继续培养24h。 1．3细胞生长抑制实验MTT法检测在200mmol，L乙醇和不同浓度LSPC共同作用下的肝细胞L．02的 生存活力。操作方法如文献所述。 uIRNAase(5 加入50ul碘化丙啶(500p咖l，含1％Trlton·100，Sigma公司)和5u∥itl)．室温避光 放置30rain后FAC$420流式细胞仪检测(Becton-Dickinson，美国)。 1．5RT-PCR分析 Table1 The ofRT-PCR primer eDNA。PCR所用引物见表l，由上海博亚生物技术公司合成。扩增产物于2％琼脂糖凝胶电泳(含 分光密度×面积表示。13．actin作内对照，各实验组与正常对照组的比值表示mRNA的相对表达水平。 ——96—— 2结果 90．52％，随后随着LSPC剂量的增加肝细胞L．02的生存率反而下降。 0．05)。5、10、25mg／L 10mg／LLSPC的细胞凋亡率与乙醇组比较差异有显著意义(尸0．05)。见表2 分别使p53基因表达降低，与乙醇组比较均P0．05；而25mg／L 高。MAPK38的表达量在各组中均无显著性差异。 一 Table2Relativelevels andMAPK38 ofp53，caspase3 mRNA(x土s，n冯) Group p53 C钻D越e3 MAPK38 COlltrOl 0．446±0．032 0．175士0．032 Etll蹰ol 1．26±O．19 0．735±0．012 0．17l±0．046 LSPC 0．174-0．043 5(me／L)0．894-0．13‘0．48±0．023 lo(mJCL) 1．12±0．20 0608±0043 0，173土0．037 25(mg／L) 1 39±005 0．777士O．026 0．1054-0077 ethanol a：P005；b：P0．01comparedwlththegroup 3讨论 乙醇是引起急、慢性肝损