梅山猪β干扰素的克隆、原核表达和生物活性研究.pdfVIP

中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集 梅山猪p干扰素的克隆、原核表达及生物活性研究 彭贵青，陈焕春，钱平 (华中农业大学动物医学院病毒室，武汉，430070) 扰素又称T免疫干扰素。IFN书是由单核巨噬细胞、成纤维细胞产生，与受体结合后，诱导机体产生抗病毒 扰素对口蹄疫、猪瘟、蓝耳病、猪流感均有很好的抗病毒效果，因而越来越受到国内外学者的关注。 本研究拟从中国梅山猪自细胞基因组中克隆IFN书基因，并通过原核表达系统进行表达，用表达产物 探讨它在抗病毒方面的作用，为今后进一步研究p干扰素在抗病毒方面的功能提供条件。 1、材料与方法 1．1菌株和质粒：Eoli TaKaRa公司。 I、BaraH 1．2工具酶和生化试剂：限制性内切酶EcoR 其他试剂均为分析纯试剂。 该引物的序列为： P15’-TTGGATCCATGGCTAACAAGTGCATCC-3’ P25’一TTGAATTCTCAGTTCCGGAGGTAATCTGT一3’ 载体，质粒提取及送TaKaRa测序。 鉴定。 积的PBS(PH7．2)重悬，然后与上样缓冲液在100 1．6包涵体的提取 中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集 L 测定重组猪p干扰素的抗病毒活性。常规培养IBRS一2在96孔板成单层后，每孔加样1002倍稀释 果。对照为空白处理孔。 2、结果 pMDl8一T载体连接后，转化DHSa，挑白色菌落提取质粒后，用BamH I和EcoRI酶切，得到2．6kb 带，与预期片段相符。 的前体蛋白，其中含21个氨基酸的信号肽和165个氨基酸的成熟多肽，成熟多肽中含3个半胱氨酸和3 个糖基结合位点。猪§干扰素(MS—IF邴)与Genebank中s41 MS—IFN 1ATGGCTAACAAGTGCATCCTCCAAATCGCTCTCCTGATGT S41178 l………一～……一………．………． MS—IFN 51 CACAGCTCTTTCCATGAGCTATGATGTGCT S41178 5l………一．．．……一………．………． MS．IFN 101 GCAATTTGGCATGTCAGAAG AGTTGCCTGG CTCCTGG囚AC S41178 10I………一．．．……一……．同…………………一 MS．IFN 151 TATTGCCTCGAAGATAGGAT GTCCCTGAGG GAACTT固GAG S41178 151一………………国……………一一 MS—IFN 1 20ACCACCACAATTCCAGAAGGAAGATGCAGTATTGATTATC S41178 201--——--·一-·—-—-—-··--．．．-—．-．．--．．-．-—．．--．．．—-．．．-．．．．．—．．．—．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． MS—IFN 251TCCAGCAGAT CTTCGGCA竹CTCAGAAGAAATlTCTCTAG S41178 251一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一．．一一．．一一一--．．．．．．．．．．．．．一一一一一一 MS—IFN 301AATG从ACCG TATCCTTGTG