HOXA9在髓系白血病细胞HL-60中表达.pdf

Jf『I|删帅册f『IfJ舶 Ⅷ删fjl『|『fI|f LY178503拶 目 录 HOXA9在髓系白血病细胞HL．60中的表达……………………1 1．1 中文摘要………………………………………………………1 1．2 英文摘要………………………………………………………4 1．3 前言……………………………………………………………8 1．4材料与方法……………………………………………………l3 1．5 结果……………………………………………………………3l 1．6 讨论…······························…··················…··．····．·…49 1．7 结论……………………………………………………………56 1．8 参考文献………………………………………………………57 1．9英汉缩略词对照表……………………………………………62 2 致谢……………···……………………······…………………63 3 HOX基因A簇及其与白血病的关系研究进展(综述) —] HOXA9在髓系白血病细胞甩．60中的表达 摘 要 ．目的：本课题主要探讨同源盒基因(Homeobox trioxide， 式维甲酸(aU．tms．retinoicacid，ATRA)和／或三氧化二砷(～semc 血病的发病机制。方法：1．采用HL．60细胞株作为白血病模型。2．实验分4 1640培养液加入基 组：(1)对照组(Nomal)：不加药物，代之等量I心MI 胞增殖抑制实验，确定所加药物的最终浓度。4．采用肿瘤细胞体外培养技术， 情况。5．采用瑞氏姬姆萨染色法鉴定细胞及其生长分化情况。6．实时荧光定 量PCR法观察HOXA9 In】ⅢA的表达情况：6．1第l天、第2天、第3天分 别提取各组细胞总RNA，用1％甲醛变性琼脂糖凝胶电泳检测砌蛆分子的完 整性。 reverse chain 转录多聚酶链反应(nuorogenicquantitivetmscriptionp01ymerize 梯度稀释制作各自的标准曲线，根据各个样本循环指数增长期的起始点即循 环域值(cycle 倍数值，以ACTB基因作为内参进行标化。6．4PCR统计方法：结果用DNA 数加减标准差仅圭S)表示HOXA9基因的变化情况。进行方差齐性检验， TOW二WAY AOM厂A方差分析，组间均数两两比较用LSD法，用统计学软件 SPSSl7．O完成。7．蛋白免疫印迹(Wrestem 况：7．1第1天、第2天、第3天分别裂解细胞提取各组细胞总蛋白。7．2用 Wrestem 和二抗)、化学发光显示目的条带。7．3图像分析：将W已stenlblot结果传送 oNE图像分析软件对蛋白条带进行分析，得到积 至计算机，用QUANTITY 分光密度值，用内参做校正得到积分光密度相对比值，代表蛋白相对表达量。 7．4westem 增多，细胞生长到达高峰后生长趋于平缓，两种浓度细胞生长趋势接近，结 合国内外文献报道以及方便实验过程中加取药物，选取10‰01／l为药物干预 的最终浓度。2．细胞的形态学鉴定，瑞氏姬姆萨染色法证明所培养的细胞是 粒细胞。Nomal组细胞第1天和第3天相比形态无明显变化；各实验组第1 天和第3天相比，第3天细胞变形，细胞核变为大小不一的不规则形，可见 分叶核、肾形核、蚕豆核，细胞核相对缩小，核／质比变小，说明细胞向成熟 方向分化。3．本实